慢性HBV感染患者特异性细胞免疫功能与病毒载量的关系研究.pdf

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1、检验医学与临床2014年9月第11卷第18期LabMedClin，September2014，Vo1．11，No．18·2571··临床研究·慢性HBV感染患者特异性细胞免疫功能与病毒载量的关系研究．韩海霞，吴玉兰，陈琳，吴月平，邵建国△(江苏省南通市第三人民医院226006)【摘要】目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者特异性细胞免疫功能与病毒载量的关系。方法选择51例慢性乙型肝炎患者(A组)、43例乙型肝炎肝硬化患者(B组)和4O例体检健康者(C组)外，采用流式细胞术检测人类白细胞抗原A2(HLA-A2)，采用HLA—A2限制的HBVcore18—27抗原表

2、位肽五聚体(Pro5MHc)法检测Pro5MHC、CD8双阳性细胞[HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)]，并比较不同HBVDNA水平患者各指标检测结果。结果A组、B组HLA_A2阳性率均明显高于c组(P<0．05)。随着HBVDNA水平的升高，HBV特异性CTL水平逐渐减低(P<0．05)，但CD8细胞水平无明显变化(P>0．05)。HBVDNA水平大于10copies／mL的患者，Pro5MHc／cD8水平明显低于HBVDNA水平为10。～10copies／mL的患者以及HBVDNA水平小于10。eopies／mL的患者(P<0．05)。结论HLA—A2是乙

3、型肝炎肝硬化的易感基因之一。HBV感染患者体内HBV特异性CTL水平随着病毒复制程度的升高而减低。Pro5MHC／CD8~可作为判断病毒复制程度的客观指标。【关键词】特异性细胞免疫；人类白细胞抗原A2；慢性乙型肝炎；肝硬化DOI：10．3969／j．issn．1672-9455．2014．18．032文献标志码：A文章编号：1672—9455(2014)18-2571—02乙型肝炎由乙型肝炎病毒(HBV)感染所致。目前全球约式细胞仪(美国BeckmanCoulter公司)计数HLA—A2阳性有3亿HBV感染患者，中国则为HBV感染高流行地区[1]。细胞。HBV特异性

4、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)介导的细胞免疫应1．2．3HBV抗原特异性CTL检测Pro5MHC检测试剂盒答在病毒清除和肝细胞损伤过程中具有重要作用。因此，研究购自英国Proimmune公司，单克隆抗体针对的HBV抗原表位特异性CTL数量和功能的变化，有利于了解乙型肝炎患者体肽为HBVeore18—27，序列为FLPSDFFPSV。FITC标记的内特异性细胞免疫功能状态，阐明慢性乙型肝炎患者病情加重CD8单克隆抗体购自美国BD公司。取全血100“L，加入CD8的免疫学机制，还能为抗病毒治疗提供用药依据¨3]。本研究采单克隆抗体和五聚体单克隆抗体各1OL，室温条件下避光

5、孵用人类白细胞抗原A2(HLA—A2)限制的HBVcore18—27抗原育30rain，溶血处理后采用PBS洗涤2次；加入500LPBS，表位肽五聚体(Pro5MHC)法，分析了慢性HBV感染患者特异采用流式细胞仪进行CD8和Pro5MHC检测，CD8和性细胞免疫功能与病毒载量之间的关系。Pro5MHC双阳性细胞为HBV特异性CTL，计算HBV特异1资料与方法性CTL在CD8细胞中所占百分比(ProSMHC／ED8)。1．1一般资料将2011年9月至2012年12月本院感染性1．2．4HBVDNA检测采用7500型荧光定量聚合酶链反疾病科收治的乙型肝炎患者94例纳入

6、患者组，其中男67例，应(PCR)检测仪(美国ABI公司)检测血清HBVDNA水平，女27例；年龄34~62岁，平均47．5岁；包括慢性乙型肝炎51检测下限为1000copies／mL。‘例(A组)、乙型肝炎肝硬化43例(B组)。所有患者均符合《慢1．3统计学处理采用SPSS15．0软件进行数据处理及统计性乙型肝炎防治指南(2010年版)》制订的相关诊断标准[4]。学分析。计量资料以±S表示，组间比较采用t检验。计数排除标准：合并其他类型肝炎病毒感染、酒精性肝炎、免疫性疾资料采用百分率表示，组间比较采用卡方检验。P<0．05为比病，3个月内未接受过免疫调节剂及抗病毒

7、治疗。另选择于本较差异有统计学意义。院体检健康者4O例纳入健康对照组(C组)，其中男24例，女2结果16例；年龄32～55岁，平均39．5岁；均排除肝脏及免疫性2．1各研究组HLA-A2阳性率比较A、B、C组HLA—A2阳，’疾病。性率分别为5O．98(26／51)、72．09(31／43)、30．00(12／1．2方法40)。B组HLA—A2阳性率明显高于A、c组(P<0．05)A组1．2．1标本采集采集所有受试者晨起空腹肘静脉血至少4HLA-A2阳性率明显高于C组(P<0．05)。mL，2mL置于普通试管中，分离血清标本用于HBVDNA检2．2不同HBVDN