慢性hbv感染患者机体免疫状况检测分析

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1、慢性HBV感染患者机体免疫状况检测分析【中图分类号】R511【文献标识码】A【文章编号】1672—3783(2011)12—0282—01【摘要】目的：检测分析慢性HBV感染患者机体免疫状况对于HBVDNA水平及HBsAg的影响。方法:选择我院2009年2月至2011年2月90例慢性HBV感染患者，按照疾病严重程度，分为观察组A(慢性重症肝炎)、观察组B(慢性乙型肝炎)和观察组C(肝硬化)，各30例，分别采取ELISA试验和流式细胞仪进行全血及血清的细胞因子白细胞介素2(IL-2)、IL10、HBV—M、淋巴

2、细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞检测，采取PCR试验对HBVDNA进行检测，观察分析检测的结果。结果：观察组A和观察组C的IL-2、IL-10、淋巴细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞与HBsAg、HBVDNA检测结果之间无明显相关(P>0.05),无统计学意义。观察组B的淋巴细胞亚群的IL-2、CD4+T细胞与HBVDNA之间呈现负相关(r=0.194,-0.566,P=0.001),具有统计学意义。观察组B的IL-10、淋巴细胞亚群的CD8+T细胞与HBVDNA检测结果之间无明显相关(r=0.213,0.

3、323,P=0.405),无统计学意义。结论：慢性HBV感染患者不同疾病类型的机体免疫状况对于HBsAg、HBVDNA有不同的影响，慢性乙型肝炎的淋巴细胞亚群的CD4+T细胞对HBsAg、HBVDNA有明显的抑制作用。【关键词】慢性HBV感染机体免疫状况HBVDNA水平HBsAgHBV引起的慢性肝病其发病机制目前仍未明确,临床上一般认为，HBV感染与机体的免疫功能变化有一定的相关性，本文通过检测分析慢性HBV感染患者机体免疫状况对于HBVDNA水平及HBsAg的影响，总结如下：1资料与方法1.1一般资料选择我

4、院2009年2月至2011年2月90例慢性HBV感染患者，男51例，女39例，年龄在24~52岁，平均年龄为37.8±0.7岁，均符合2000年中华医学会在西安会议上修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准，按照疾病严重程度，分为观察组A（慢性重症肝炎）、观察组B（慢性乙型肝炎）和观察组C（肝硬化），各30例，分别采取ELISA试验和流式细胞仪进行全血及血清的细胞因子白细胞介素2（IL-2）、IL10、HBV—M、淋巴细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞检测，采取PCR试验对HBVDNA进行检测，观察分析检测的结

5、果。三组患者从年龄、性别等方面对比无显著差异(P>0.05),具有可比性。1.1仪器与试剂(1)HBV—M、IL-2、IL10检测:采用上海实业科华生物技术有限公司提供的试剂盒，酶标仪，Wdlsean洗板机(Labsystems提供，型号：MK)；(2)CD4+、CD8+T细胞检测：流式细胞仪(型号：EPICSXL)>软件SYSTEMII；(3)HBVDNA检测：采用洛阳华美生物工程公司提供的试剂盒，电泳仪(EPS300),单槽式扩增仪(型号：黑马8000)o1.3方法1.3.1样本采集与处理在患者上臂采集3

6、~5ml的静脉血，在37oC下进行全血孵化20分钟后，给予离心试验，选择2400r/min,离心lOmin后，分离取出上清液(血清)，保存在-20oC下备用待测。1.3.2检测方法(1)HBV—M、IL-2、IL10检测:进行酶联免疫吸附实验，即ELISA试验，操作方法及结果判断严格按试剂盒上的要求进行。(2)CD4+、CD8+T细胞检测：校准好光路及流路，保证所有荧光信号的变异系数(CV)均V2%。异硫氧酸荧光素(FITC)为荧光I,藻红蛋白(PE)为荧光II,藻红蛋白-花青昔(PE-Cy5)为荧光IV,滤

7、光片的波长分别是525、575、675nm,然后对荧光阴性的范围，即阴性对照进行确定，对PMT电压进行校准，对颜色进行补偿，对淋巴细胞的检测进行参数测定，平均每份标本可测定细胞个数为5000个，测定出来的数据均采用流式细胞仪及SYSTEMII件进行分析。(3)HBVDNA检测：使用聚合酶链反应(PCR)技术进行试验，灵敏度在10-5Pg/ml,在进行血清HBVDNA检测前，应先对样品进行制备，将血清从-20°C下取出，解冻后，取出lOOPl加入到10%的10Hl的SDS及20mg/ml的蛋白酶K中，在37°C

8、下放置过夜消化后，使用酚：氯进行仿抽提两次，再在-20°C下以无水乙醇进行沉淀，沉淀物应用20卩I的TE进行溶解。将制备好的血清样品进行PCR试验，每次PCR操作均设置成阴性、阳性对照试验。在紫外灯下对扩增结果进行判读，阳性标准为：样品出现的红橙色光带与阳性的对照处于同一水平的位置1.4统计学方法本组数据采用SPSS13.0统计学软件进行处理，组间比较采用系数r检验，以P：2]o本文中统计发现，慢性