附子多糖、rhIL-2与阿霉素不同靶向制剂靶向治疗肿瘤的协同作用研究

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1、中文摘要附子多糖、rhlL-2与阿霉素不同靶向制剂靶向治疗肿瘤的协同作用研究摘要恶性肿瘤一直是威胁人类生命健康的主要疾患。全世界每年死于癌症的患者有数百万人。虽然人们提出了包括手术治疗、放疗、化疗等多种治疗方法，但是由于受到适应症、副作用等因素的限制，对恶性肿瘤的治疗效果仍不理想。因此，采用多种途径并用，着眼于靶向治疗肿瘤的综合治疗方式，对肿瘤的治疗更具潜力。祖崮医学对于瘾瘕(肿瘤)的治疗一贯采取扶正和祛邪并用的原则，即在杀灭肿瘤细胞的同时，也要提高机体的免疫功能，增强机体自身对疾病的抵御能力。化疗药阿霉素能将其分子嵌入DNA中，抑制核酸的合成，从

2、而可以杀灭多种肿瘤，但同时也损伤机体正常组织。如何使阿霉素在肿瘤靶部位集中，减低其对机体正常组织的损伤，是发挥其治疗作用的关键。本研究以阿霉素靶向肿瘤治疗为中心，配合应用中药附子多糖或细胞因子rh几-2，目的是在应用化疗药杀伤肿瘤的同时，设法保护和增强机体的免疫功能，从而达到更好的抗肿瘤效果。肿瘤发生后，主要表现为机体的免疫功能下降(T细胞，NK细胞功能降低)，T细胞的增殖情况改变、细胞因子的产生与表达变化，癌基因、抑癌基因的表达变化等。所以本研究以荷瘤小鼠为模型，在整体水平，从抑瘤率、生命延长率、淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤活性、细胞因子表达、癌基

3、因表达、诱导肿瘤细胞凋亡及组织病理学等方面探讨和评价了附子多糖、rhIL．2与阿霉素不同靶向制剂联合应用的抗肿瘤效果和抗肿瘤机制。同时观察了阿霉素的体内不同组织间的药代动力学变化。目的是寻找最佳的抗肿瘤综合治疗途径，有效地控制和杀灭肿瘤，并且最大程度地降低副作用。目的：观察附子多糖和附子酸性多糖对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用，探讨其抗肿瘤机制；观察附子多糖、rhIL-2与阿霉素白蛋白磁微球或阿霉素脂质体靶向治疗的抗肿瘸协同作用，研究综合治疗的抗肿痛机制，确定最±查塑墨——佳的综合治疗方式。方法：(1)药物制备：采用水提醇沉法提取附子多糖和附子酸性多糖，灌

4、胃给药或腹腔注射给药；采用改良法制备5口』霉素白蛋白磁微球，尾静脉注射给药；逆相蒸发法制备阿霉素脂质体、阿霉素长循环脂质体和阿霉素长循环热敏脂质体，尾静脉注射给药；(2)抑瘤实验：建立荷瘤小鼠模型，以荷瘤小鼠的肿瘤重量为指标观察药物的抗肿瘤活性并计算抑瘤率；以荷瘤小鼠的存活天数计算生存时间和生命延长率；(3)药代动力学测定：以高效液相色谱法(}玎?LC)测定静脉给药后24h内游离阿霉素以及各种阿霉素脂质体的药代动力学规律及组织学分布特征，观察阿霉素在小鼠体内的组织分布以及对肿瘤、心脏等不同组织的影响。(4)抗肿瘤机制分析：以乳酸脱氢酶释放法(LDH

5、)测定NK细胞活性，MTT法测定淋巴细胞转化率，流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、肿瘤细胞的增殖指数及p53、Fas、FasL和Caspase．3表达，RT-PCR法测定脾细胞IL-2mRNA及IL一12mRNA的表达，制作病理切片观察肿瘤、心脏、肝脏和肾脏的组织病理学变化，探讨抗肿瘤机制。结果：(1)附子多糖和附子酸性多糖对1522荷瘤小鼠肿瘤有显著的抑制作用，灌胃给药的抑瘤率分别达到54．93％和52．03％，腹腔注射给药的抑瘤率分别达到50．80％和60．16％％。附子多糖灌胃给药对S180荷瘤小鼠的肿瘤也有明显的抑制作用，抑瘤率达45．30％；两

6、种多糖均显著延长了H22荷瘤小鼠的存活时问，其中附子多糖灌胃给药，使H22荷瘤小鼠的生命延长率达121．35％：两种多糖通过两种途径给药，均显著提高了H22荷瘤小鼠的NK细胞活性(p<0．01Orp<0．05)，其中附子多糖中剂量灌胃给药的作用最佳。附子多糖灌胃给药，明显提高了H22和S180荷瘤小鼠的淋巴细胞转化率，而附予酸性多糖灌胃给药，仅仅显著提高了S180荷瘤小鼠的淋巴细胞转化率(p<0．0lOrp<0．05)；两种多糖均使H22荷瘤小鼠的肿瘤细胞凋亡率明显增加(p

7、碎裂，形成凋亡小体。(2)阿霉素白蛋白磁微球外加磁场靶向治疗与非磁场靶向治疗比较，显著增强了抑瘤作用，抑瘤率分别为52．42％和29．03％。靶向治疗提高了荷瘤小鼠的NK细胞活性和淋巴细胞转化率(p

8、多的肿瘤细胞坏死、破碎；给药后肝脏、肾脏组织未见明显异常变化。(3)附子多糖与阿霉素白蛋白磁微球外加磁场靶向联合应用，进一