肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受Akt通路调节

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1、分类号星Z呈UDC：密级：重庆医科大学硕士学位论文论文题目肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受Akt通路调节作者姓名张小丽指导教师姓名(职称、单位名称)高建教授重庆医科大学附属第二医院消化内科申请学位级别硕士学科、专业名称消化内科学论文答辩年月2013年5月2013年4月lIIIHIIII1111111111111111111I[IUlY2412404重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下迸行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不

2、包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者签名：季艮fn丽日期：知f揖厶卜日门日学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关

3、部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，并编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。保密论文在解密后适用本授权书。论文作者签名：亏匙小丽指导教师签名：L萄老日期：弘f≥耸斗鼠l?闫目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4论文正文：肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受Akt通路调节⋯⋯⋯⋯．7前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．71实验材料与主要

4、器材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．81．2主要器材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．92实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．92．1细胞球培养及传代⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．92．2肝癌干细胞标记物CD90的表达量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．92．3(31)90、P．AKT分子的免疫荧光表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．102．4体外克隆形成实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．5细胞球的分化培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．6SCID小鼠体内成瘤实验⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．102．7盯T法检测各组细胞增殖率⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．112．8AnnexinV-FITC单标法检测各组细胞凋亡率⋯⋯⋯⋯⋯．．”2．9Westernbiot法检测各组细胞中P-Ak七、AKT蛋白含量⋯⋯．．”3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．113．1肝癌细胞株培养7d后所形成的细胞球形态⋯⋯⋯⋯⋯⋯．113．2流式细胞仪检测分子标记物CD90的表达量⋯⋯⋯⋯⋯⋯．123．3C090、P-AKTlS473分子在细胞球里的免疫荧光表达⋯⋯⋯．．133．4克隆形成能力分析⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．143．5PLC细胞球经含血清培养基刺激后分化为非肝细胞样细胞⋯⋯153．6SCID小鼠体内成瘤实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．153．7PLC细胞球对化疗药物阿霉素的耐药性及其机制⋯⋯⋯⋯．．183．8PLC细胞球的耐药性受PI3K／Akt通路调节⋯⋯⋯⋯⋯⋯．184讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。19参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．33硕士期间发表的论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34重庆医科大学硕士研究生学位论文肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受Akt通路调节研究背景和目的摘要肝癌在全球肿瘤发病率位于第五位，占肿瘤致死原因的第三位。目前肝癌的治疗以手术、放疗、化疗等传统治疗方法为主，但治疗效果不理想。近些年来，肿瘤干细胞理论的提出为肿瘤的研究、治疗提供了新的思路。越来越多的证据表明肿瘤组织是由不同的异质细胞构成，导致肿瘤发生和维持肿瘤生长的是肿瘤细胞中的极少一部分细胞，这些细胞即为“肿瘤干细胞"。

8、这些细胞具有肿瘤干细胞特性：自我更新、分化及体内高致瘤等能力。肿瘤干细胞学说认为肿瘤干细胞是肿瘤组织形成、复发、转移的原因，也是肿瘤放疗、化疗失败的原因，故对肿瘤的治疗应针对肿瘤干细胞以达到根除肿瘤的目的。本研究旨在采用无血清悬浮球培养法从人肝细胞性肝癌细胞株中分离肝癌干细胞样细胞，初步探讨Akt通路调节其对化疗药物阿霉素的敏感性。方法1．将人肝癌细胞株PLC、HepG2、Hep3B置于无血清条件培