肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受pi3kakt通路调节

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1、肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受PI3K/Akt通路调节张小丽1，高建1，贾茜1，邓涛2（400010重庆，重庆医科大学附属第二医院消化内科1;M5G2M1Toronto，Ontario，Canada，TorontoGeneralResearchInstitute，UniversityofToronto2）[摘要]目的分离肝癌干细胞样细胞，初步探讨PI3K/Akt通路调节其对化疗药物阿霉素的敏感性。方法将人肝癌细胞株PLC、HepG2、Hep3B置于无血清条件培养基中培养，形成细胞球，选用PLC细胞

2、株进行后续实验。采用流式细胞术、克隆形成实验、SCID小鼠体内成瘤实验鉴定PLC细胞球（肝癌干细胞样细胞）的肿瘤干细胞特性。MTT法、流式细胞仪测定PLC细胞球对化疗药物阿霉素的敏感性。流式细胞术分析加入PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002、阿霉素共同孵育细胞球后，其凋亡率的变化。Westernblot法比较PLC细胞球、PLC贴壁细胞中P-AKT1S473蛋白分子表达量及加入抑制剂LY294002作用于细胞球后，P-AKT1S473、AKT1蛋白分子表达量的变化。结果肝癌干细胞标志物CD

3、90在细胞球中的表达较贴壁细胞显著升高（P<0.01）。细胞球的克隆形成数目（123.00±28.48）为贴壁细胞（56.33±7.37）的2.18倍（P<0.05）。同样细胞数接种于SCID小鼠皮下7周后，细胞球的致瘤率明显大于贴壁细胞。以5μg/ml的阿霉素分别处理细胞球和贴壁细胞48h后，细胞球的增殖率（71.83±12.3）%明显高于贴壁细胞[（45.68±5.95）%（P<0.05）]，凋亡率（11.73±3.77）%显著低于贴壁细胞[（41.22±6.73）%（P<0.01）]，而以阿霉素

4、5μg/ml和LY294002共同孵育细胞球后，其凋亡率（35.44±6.65）%显著增加（P<0.01）。Westernblot检测到细胞球的P-AKT1S473蛋白分子表达量显著高于贴壁细胞（P<0.01），加入抑制剂LY294002处理细胞球后，P-AKT1S473蛋白表达量明显降低(P<0.05)，AKT1的表达量无明显变化。结论肝癌干细胞样细胞对化疗药物阿霉素具有耐药性，其耐药机制与Akt信号通路第473位点磷酸化AKT1分子有关。[关键词]肝细胞癌；肿瘤干细胞；细胞球；化疗耐药；PI3K/

5、Akt[中图法分类号][文献标志码]AIsolationofHCCCancerStem-likeCellsandtheChemoresistancemediatedbyPI3K/AktpathwayZhangXiaoli1，GaoJian1，JiaQian1，DengTao2（1DepartmentofGastroenterology，SecondAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400010，China;2TorontoGe

6、neralResearchInstitute，UniversityofToronto，M5G2M1，Toronto，Ontario，Canada）[Abstract]ObjectiveToisolateHCCCancerStem-likeCellsandpreliminarilydiscussPI3K/AktpathwaymediatingthesensitivityofliverCancerStem-likeCellstochemotherapeuticdrugdoxorubicin(DOX).Me

7、thodsHumanhepatocellularcarcinoma(HCC)celllinesPLC、HepG2、Hep3Bwereculturedinserum-freeconditionmediumtoformtumorspheresandPLCcelllinewasselectedtoproceedthesubsequentexperiments.Fluorescence-activatedcellsorting(FACS)andcolonyformationassayandSCIDmicetu

8、morigenicityexperimentsinvivowereusedtoidentifythetraitsofCSCsinPLCspheres（liverCancerStem-likeCells）.DetectthesensitivityofspherestochemotherapeuticdrugDOXwithMTTandFACS.AnalysethevariationofapoptosisratewithFACSafterjoiningDOXa