转化生长因子β1噬菌体模拟肽抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验研究

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1、医学杂志2011年1O月18日第91卷第38翅—atlMedJchiQer：：：!：．基础研究．转化生长因子l31噬菌体模拟肽抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验研究刘振中姜笃银蔡景龙宗宪磊张基勋单菲王文婷王魏【摘要】目的从噬菌体随机12肽库中筛选获得转化生长因子(TGF)131噬菌体模拟肽，评估其抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用。方法以人TGF一131单克隆抗体为靶，生物淘选噬菌体模拟肽。噻唑蓝(MTr)比色法定量测定活细胞的数量。AnnexinV—FITC／PI凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测对成纤维细胞的凋亡作用。免疫荧光测定检测模拟

2、肽与成纤维细胞的亲和力。实时定量PCR分析方法检测成纤维细胞核因子KB(NF—KB)，结缔组织生长因子(CTGF)的表达水平。结果共获得1O种噬菌体模拟肽，具有与TGF一131、TGF一132、TGF—p受体11(T13RlI)、TGFp诱导因子、NF—KB或细胞分裂原素活化蛋白激酶(MAPK)相似的序列。M1Tr比色测定结果显示4种(第7～1O组)噬菌体模拟肽组能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖(P<0．05)。免疫荧光测定显示是噬菌体上的模拟肽，而不是噬菌体本身，能够与瘢痕疙瘩成纤维细胞相结合；凋亡实验显示这4种噬菌体模拟肽能够轻度促

3、使瘢痕疙瘩成纤维细胞发生轻度的晚期凋亡；实时定量PCR的结果显示这4种噬茵体模拟肽NF—KB的表达降低，表达量分别是阴性对照组的0．28、0．26、0．46、0．30倍，4种噬菌体模拟肽CTGF的表达降低，表达量分别是阴性对照组的0．26、0．60、0．34、0．17倍。结论噬菌体模拟肽可能是通过调节NF—KB及CTGF的表达，调节瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖。【关键词】瘢痕疙瘩；成纤维细胞；肽库；转化生长因子131；细胞增殖StudyofTGF-阻phagemodelpeptidesoninhibitingkeloidfibroblas

4、tsproliferationuZhen—zhong，JIANGDu一n，CAIJing—long，ZONGXian—lei，ZHANGJi—un，SHANFei，ⅣGn—ting，WANG眈DepartmentofPlasticSurgery，SecondHospital，ShandongUniversity，Jinan250033，inaCorrespondingauthor：tANGDu—yin，DepartmentofPlasticSurgery，SecondHospital，ShandongUniversity，Jinan2

5、50033，China，Email：jdybs2@vip．163．corn【Abstract】0bjectiveToisolatethetransforminggrowthfactor—beta1(TGF-131)phagemodelpeptidesfromphage12．merdisplaypeptidelibrarytoinhibittheproliferationofkeloidfibroblasts．MethodsThephagedisplay12一merpeptidelibrarywasscreenedfor4roundsw

6、ithmonoclonalanti．humanTGF-131asthetargettoyieldthespecificphagemodelpeptides．1’he3一(4，5-dimethyhhiazol一2一y1)一2，5一diphenyhetrazoliumbromide(MTT)assaywasusedforthequantitativedeterminationofcellularproliferation．ApoptosiswasdetectedbytheAnnexinV—FITC／PIapoptosisdetection

7、kitandthecellswereanalyzedwithfloweytometry．Immunofluorescentassaywasemployedtoshowthebindingaffinityofmodelpeptidesforkeloidfibroblasts．Quantitativereal—timepolymerasechainreaction(PCR)wasperformedtodetecttheexpressionsofnuclearfactorkappaB(NF．KB)andconnectivetissuegro

8、wthfactor(CTGF)．ResultsTenphagemodelpeptideswereobtainedandtheyweresimilartoTGF一131，TGF一132，TGF一8receptorI1(T[