重组人内抑素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响及机制研究

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1、目录英文缩略词………………………………………………………………1中文摘要…………………………………………………………………3英文摘要…………………………………………………………………5重组人内抑素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响及机制研究1.前言…………………………………………………………………82.实验材料……………………………………………………………103.实验方法……………………………………………………………124.结果…………………………………………………………………175.讨论…………………………

2、………………………………………256.小结…………………………………………………………………297.结论…………………………………………………………………298.参考文献……………………………………………………………30附录………………………………………………………………………34致谢………………………………………………………………………35综述及参考文献…………………………………………………………363英文缩略词表英文缩写英文全称中文全文AAadjuvantarthritis佐剂性关节炎CDK4cycli

3、n-dependentkinase4周期蛋白依赖性激酶-4周期蛋白依赖性激酶抑制CKIcyclin-dependentkinaseinhibitor因子dday天DMEMDulbecco'sModifiedEagleMedia培养基DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜FCMflomcytometry流式细胞仪FCSfetalcalfserum胎牛血清FLSfibroblast-likesynoviocytes成纤维样滑膜细胞ggram克hhour小时HShypertrophicscar增生性

4、瘢痕HEhematoxylinandeosin苏木精和伊红IC5050%Inhibitionconcentration半数抑制浓度Kkeloid瘢痕疙瘩KFskeloid-derivedfibroblasts瘢痕疙瘩成纤维细胞mgmilligram毫克MTTThiazolylblue噻唑蓝NSnormalsaline生理盐水ODopiticaldensity光密度PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PCNApreliferationcellnuclearantigen增殖细胞核抗

5、原PIpropidiumiodide碘化丙啶1RArheumatoidarthritis类风湿性关节炎rpmrevolutionsperminute转/分rhEndostatinrecombinanthumanendostatin重组人内抑素ssecond秒VEGFvascularendothelialgrowthfactor血管内皮(细胞)生长因子2重组人内抑素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响及机制研究摘要目的观察重组人内抑素（recombinanthumanendostatin,rhEndostatin

6、）对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid-derivedfibroblasts,KFs)增殖的影响，探讨其作用的细胞与分子机制，为瘢痕疙瘩（keloid）药物治疗及寻找治疗新靶点提供实验依据。方法①瘢痕疙瘩组织的HE染色：术后取瘢痕疙瘩组织，4%多聚甲醛固定、梯度酒精脱水、二甲苯透明、常规石蜡包埋、切片；苏木素-伊红(HE)染色；中性树胶封片；显微镜观察并摄片。②KFs体外培养：7例瘢痕疙瘩组织标本（腹部2例，耳垂4例，大腿1例）均来自安徽医科大学附属医院整形外科瘢痕疙瘩患者，按文献方法进行成纤维细

7、胞原代培养，待细胞融合后传代，实验所用细胞均为处于第3代对数生长期的KFs。③细胞鉴定：体外培养的细胞通过细胞形态学观察和细胞免疫组化染色检测对其性质进行鉴定。④细胞增殖检测：取第3代KFs，分别用-6-5-5-5-4不同剂量rhEndostatin(6.25×10,1.25×10,2.50×10,5.00×10,1.00×10mg/L)作用24h，48h，72h，采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测各剂量rhEndostatin对KFs的抑制率，计算rhEndostatin对KFs作用的半数抑制浓度（

8、50%Inhibition-5concentration，IC50），本实验IC50为5.00×10mg/L。⑤细胞周期检测：传2代培-5养的KFs接种于6孔培养板中，细胞分设对照组、rhEndostatin组（5.00×10mg/L）、5-氟尿嘧啶（5-FU）组（0.5mg/mL），用无血清的培养液培养24h，使细胞周期同-5步化，继之换上含20%血清的培养液，并相应加入rhEndostatin(终剂量5.00