酸性成纤维细胞生长因子(afgf)对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞增殖及ⅰ、ⅲ型胶原分泌影响的研究

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1、中图分类号酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞增殖及I、III型胶原分泌影响的研究AstudyontheproliferationaswellascollagenI、collagenIIIsecretionofkeloidandnormalfibroblastaffectedbyaFGFsecretiono：tkeloidandnormaltibroblastatlectedaFF计：学位论文：47页表格：9个插图：14幅赵庆阳指导教师：秦宏智教授申请学位级别：硕士学位学科(专业)：外科学培养单位：大连医科大学附属第一医院完成时间：

2、二。一三年四月答辩委员会主席：附件1：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：柳签字日期：垃年』月立日附件2：关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅

3、和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密口。作者签名：权弹翩虢昼嚷智日期≥川弓年岁月{；日日恐少疗年厂月扩日2．10Westernblot检测细胞中I、III型胶原蛋白的表达⋯⋯⋯⋯142．11细胞培养上清液中胶原蛋白总量的的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．12统计学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161

4、形态学观察及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯DOO⋯⋯⋯⋯⋯162MTT法检测aFGF对瘢痕疙瘩及正常皮肤培养成纤维细胞增殖的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯173PCNA检测aFGF对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖情况⋯⋯⋯⋯204实时荧光定量PCR检测I、III型胶原蛋白mRNA的表达结果225Westernblot检测细胞中I、III型胶原蛋白的表达结果OODO0256细胞培养上清液中胶原蛋白的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32(

5、六)参考文献⋯⋯⋯⋯O0·OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33三、文献综述⋯⋯⋯⋯⋯OOOOOOOOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36(一)综述⋯⋯⋯OOeOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47大连医科大学硕士学位论文酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞增殖及I、III型胶原分泌影响的研究硕士生姓名：赵庆阳指导教师：秦宏智教授指导小组：

6、秦宏智教授蔡景龙教授专业名称：外科学摘要目的探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞(KeloidfibroblastKFB、NormalskinfibroblastNFB)的增殖及I、III型胶原蛋白合成的调控作用。方法选取15例瘢痕疙瘩组织，10例正常皮肤组织，采用组织块法培养瘢痕疙瘩成纤维细胞，两步酶消化法培养正常皮肤成纤维细胞，以瘢痕疙瘩成纤维细胞为实验组，以正常皮肤成纤维细胞为对照组，进行以下研究：(1)采用倒置显微镜观察成纤维细胞形态，透射电镜观察成纤维细胞的超微结构；(2)采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)

7、连续7天检测不同浓度aFGF作用下成纤维细胞的增殖情况，并绘制生长曲线，计算其最佳作用时间；(3)采用免疫组化法检测成纤维细胞增殖细胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen，PCNA)的表达情况；(4)通过实时荧光定量PCR测定成纤维细胞I、III型胶原蛋白mRNA的表达量；(5)通过Westernblot法测定细胞中I、III型胶原蛋白的表达量；(6)通过检测培养基中胶原蛋白的含量来检测细胞外胶原的分泌量。结果瘢痕疙瘩组织及正常皮肤组织，均成功培养出成纤维细胞。(1)成纤维细胞形态学比较：瘢痕疙瘩与正常皮肤成纤维细胞均呈长梭形

8、、不规则形，胞质饱满，胞核淡然，呈椭圆