花生四烯酸对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：416523212165南昌大学专业学位研究生学位论文花生四烯酸对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响研究Theeffectofarachidonicacidonproliferationofhumanhypertrophicscarfibroblasts罗飞培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：辛国华副教授、副主任医师指导教师姓名、职称：曾元临教授、主任医师专业学位种类：临床医学专业领域名称：外科学论文答辩日期：2015年5月27日答辩委员会主席：评阅人：2015年5月学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人

2、在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制

3、手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：观察花生四烯酸对体外培养的人增生性瘢痕（HypertrophicScar，HS）成纤维细胞（Fibroblast，FB

4、）增殖的影响，并探讨花生四烯酸（Arachidonicacid，AA）在抑制人HS中FB增殖的可能作用机制。方法：（1）HS组织取自本院烧伤科行瘢痕整形手术患者，采用改良组织块联合胰酶消化法培养FB，取第4代FB用于实验；（2）倒置显微镜下观察含不同浓度（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L）AA培养基培养一定时间FB的形态变化；（3）分别用含上述不同浓度AA的10%胎牛血清培养基培养FB24h、48h、72h后，CCK法检测FB增殖活力；（4）制作FB爬片，免疫细胞化学法检测加入上述含不同浓度AA培养基培养24小时

5、后FB核中Ki-67蛋白的表达情况。结果：（1）组织块接种后第6d见细胞游出，呈单个散在长梭形，第10d组织块周围细胞明显增多，第15d左右组织块周围细胞生长密集，开始相互融合。细胞传代后7d左右基本长满瓶底，培养瓶瓶底细胞呈毛刷状、漩涡状或放射状生长，胞体呈长梭形，周围可见长短不一的突起，细胞排列整齐规律（2）在一定浓度的AA作用下，FB的生长形态出现明显变化。AA浓度为5μmol/L、10μmol/L时，FB细胞数量增加，细胞形态及生长走向未受到明显影响；AA浓度为20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L时，FB的形状开始表现出不规整，细胞大小不均匀，形状改变，部分

6、细胞呈圆钝形，数量减少，胞核浓缩。AA浓度越高，FB的形态改变表现越明显。（3）FB在5μmol/L、10μmol/L浓度的AA作用下，FB存活率未受到明显影响（p>0.05），20-80μmol/LAA浓度范围内，FB随着AA作用浓度或时间的增加其抑制率均逐步增加（P<0.05，且该浓度范围内各组间比较P<0.01）。（4）免疫细胞化学显示AA浓度为20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L时，FB核中Ki-67蛋白表达阳性细胞百分率均显著低于AA浓度为0μmol/L时（P<0.05），且AA浓度越高，Ki-67蛋白阳性细胞百分率越低（P<0.01）；AA浓度为5μmo

7、l/L、10μmol/L时，Ki-67蛋白阳性细胞百分率低于AA浓度为0μmol/LII摘要时，但无统计学意义（P>0.05）。结论：一定浓度的AA能抑制人HSFB的增殖，使处于分裂期细胞数量减少，这可能为其抑制HS形成作用机制之一。关键词：花生四烯酸；增生性瘢痕；成纤维细胞；增殖；ki-67抗原IIIAbstractABSTRACTObjective:Toobservetheeffectsofarachidonicacidonhumanhypertrophicsca