人增生性瘢痕成纤维细胞的分离、培养

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1、人增生性瘢痕成纤维细胞的分离、培养袁源(南昌市第三医院江丙南昌330006)【关键词】成纤维细胞的分离、培养；组织块培养法；酶消化法；体外培养成纤维细胞【中图分类号】R329【文献标识码】A【文章编号】1007-8231(2015)11-0105-02随着当今科技发展，细胞研究成为热点，因此合适细胞培养方法成为实验的基础。木实验主要在组织块培养法上进行改进，为寻找比较合适的人增生性瘢痕成纤维细胞的分离、培养的方法提供依据，提高实验效率。1.实验方法标木取自我院骨科患者(伤后5月)，采用组织块和组织块消化培养

2、法，体外培养成纤维细胞第4〜8代后，各分为4组。2.人增生性瘢痕成纤维细胞的分离、培养标木由木院骨科医牛.术中切取(经患者及家属知情同意，证实术前未进行任何药物治疗，5岁小儿伤后5月瘢痕，红色，稍高出周边皮肤)。切取瘢痕置于生理盐水培养皿中，送入实验室，给予酒精浸泡5秒，送入无菌台，放入含有青霉素(100U/mL)和链霉素(100U/mL)的Hank,s液中漂洗。首先用眼科剪剪除瘢痕的表皮及皮下脂肪，再将真皮层剪成1mm?左右的块状物，使用组织块法接种4瓶:将小块种植于25cm?培养瓶瓶底，保持间距lcm,

3、翻转瓶底朝上，使用10ml注射器抽取含10%胎牛血清、青霉素(lOOU/ml)和链霉素(100U/ml)的DMEM培养液,注入培养瓶中，4mL左右，将培养瓶置于37°C、5%CO2饱和湿度的培养箱中，瓶盖扭松1/4圈。静置4小时，组织块贴牢瓶底后，缓慢翻转培养瓶，使培养液浸过所有组织块，继续培养。剩余组织块采用改进组织块法，浸入0.25%胰蛋白酶和0.02%依地酸溶液，水平面高岀组织约2cm,室温保持30分钟后，送入4°C人增生性瘢痕成纤维细胞的分离、培养袁源(南昌市第三医院江丙南昌330006)【关键词】

4、成纤维细胞的分离、培养；组织块培养法；酶消化法；体外培养成纤维细胞【中图分类号】R329【文献标识码】A【文章编号】1007-8231(2015)11-0105-02随着当今科技发展，细胞研究成为热点，因此合适细胞培养方法成为实验的基础。木实验主要在组织块培养法上进行改进，为寻找比较合适的人增生性瘢痕成纤维细胞的分离、培养的方法提供依据，提高实验效率。1.实验方法标木取自我院骨科患者(伤后5月)，采用组织块和组织块消化培养法，体外培养成纤维细胞第4〜8代后，各分为4组。2.人增生性瘢痕成纤维细胞的分离、培养

5、标木由木院骨科医牛.术中切取(经患者及家属知情同意，证实术前未进行任何药物治疗，5岁小儿伤后5月瘢痕，红色，稍高出周边皮肤)。切取瘢痕置于生理盐水培养皿中，送入实验室，给予酒精浸泡5秒，送入无菌台，放入含有青霉素(100U/mL)和链霉素(100U/mL)的Hank,s液中漂洗。首先用眼科剪剪除瘢痕的表皮及皮下脂肪，再将真皮层剪成1mm?左右的块状物，使用组织块法接种4瓶:将小块种植于25cm?培养瓶瓶底，保持间距lcm,翻转瓶底朝上，使用10ml注射器抽取含10%胎牛血清、青霉素(lOOU/ml)和链霉素

6、(100U/ml)的DMEM培养液,注入培养瓶中，4mL左右，将培养瓶置于37°C、5%CO2饱和湿度的培养箱中，瓶盖扭松1/4圈。静置4小时，组织块贴牢瓶底后，缓慢翻转培养瓶，使培养液浸过所有组织块，继续培养。剩余组织块采用改进组织块法，浸入0.25%胰蛋白酶和0.02%依地酸溶液，水平面高岀组织约2cm,室温保持30分钟后，送入4°C冰箱消化过夜。次日清晨，取出培养瓶，洒精消毒后送入无菌台，取出组织，以10%胎牛血清终止消化。使用吹打管将小块种植于25cm?培养瓶瓶底，保持间距lcm,翻转瓶底朝上。使用

7、10ml注射器抽取含10%胎牛血清、青霉素（100U/ml>和链霉素（100U/ml）的DMEM培养液，注入培养瓶中，4mL左右，将培养瓶置于37°C、5%CO2饱和湿度的培养箱中，瓶盖扭松1/4圈。静置4小吋，组织块贴牢瓶底后，缓慢翻转培养瓶，使培养液浸过所冇组织块，继续培养。每隔5天换液，待细胞游离、扩增至基本融合成片达瓶底80%后，进行消化传代。10ml注射器吸去瓶中培养液，D-Hanks液漂洗3次后，加入0.25%胰蛋白酶和0.02%依地酸溶液，消化1〜3min,肉眼可见瓶底斑片脱落、漂浮、溶解，立

8、即送入显微镜下观察：细胞明显失去两极，冋缩、变成圆球形，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液终止消化，用弯头吸管反复吹打瓶壁细胞，吹打时动作轻柔，顺序从瓶底一侧吹响另一侧。将消化下的细胞置入离心管离心，去上清，加入培养液6ml左右，按1:3比例接种于新的培养瓶中，并补加含10%胎牛血清的DMEM培养液，混匀，于温箱中继续培养。3天左右，当细胞再次长满时，继续按1:3传代。（实验采用第4〜8代细胞进行）1.两种不同