三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的作用

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1、三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的作用【摘要】目的：观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的作用。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，分别以400μg/mL和800μg/mLPNS处理细胞，在激光共聚焦显微镜下观察细胞内钙离子浓度的变化。结果：随着给药浓度的增加，和空白对照组相比，各给药组的细胞内钙离子浓度均有所下降(P<0.05)，两给药组之间差异也具有统计学意义(P<0.05)。结论：三七总甙能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度，并具有剂量依赖效应。【关键词】瘢痕;成纤维细胞;三七总甙;钙离子　　[ABSTRACT]Objective:Too

2、bservetheeffectofthepanaxnotoginsengsaponins(PNS)ontheintracellularfreecalciumcontentrationinhumanhypertrophicscarfibroblastsinvitro.Methods:ThehypertrophicscarfibroblastswereculturedinvitroandtreatedwithPNS(400and800μg/mLconcentration).Theintracellularfreecalciumconcentrationwasinvestgatedbyconf

3、ocallasermicroscopy.Results:Comparedwiththecontrolgroup,theintracellularfreecalciumconcentrationwasinhibitedsignificantlyafterPNStreatment(P<0.05),andtherewassignificantdifferencebetweenthetwoPNStreated9groups(P<0.05).Conclusion:ThePNScaninhibittheintracellularfreecalciumconcentrationinhuma

4、nhypertrophicscarfibroblastswiththedosedependentmanner.　　[KEYWORDS]Scar;Fibroblast;Panaxnotoginseng;Freecalcium　　增生性瘢痕(hypertrophicscar,HS)是临床上常见的皮肤纤维化疾病之一，瘢痕的异常增生和挛缩常常导致患者外观畸形和功能障碍，目前仍未发现满意的预防和治疗方法。药用三七是五加科人参属多年生草本植物三七的根，三七总甙(panaxnotoginseng，PNS)是三七的有效成分，具有防治肝、肾及肺部纤维化疾病的作用[1]，近年来对于三七总甙作用于人增生性瘢

5、痕的研究工作也取得一定的进展[2]。成纤维细胞内的Ca2+浓度，与细胞增殖、细胞外基质合成及降解有着密切的关系。本实验通过观察三七总甙作用于体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophicscarfibroblast,HSF)后，细胞内Ca2+浓度变化情况，以进一步探讨三七总甙抑制人增生性瘢痕的作用机制。　　1材料和方法　　1.1实验材料9　　三七总甙粉剂购置于云南金泰得制药总公司。培养液为DMEM(美国HYCLONE公司)，医用净化工作台(苏州净化设备公司YJ875型)，二氧化碳培养箱(美国SHELLAB1815TC型)，倒置相差显微镜(重庆光学仪器厂XSJD型)，Oly

6、mpus光学显微镜，激光扫描共聚焦显微镜(德国)。　　1.2实验方法　　1.2.1人增生性瘢痕成纤维细胞体外培养实验所用瘢痕组织均为北京军区总医院烧伤整形科的烧伤后瘢痕患者手术所取的标本，均为烧伤创面愈合3个月以上，瘢痕仍持续增生者，共6例。瘢痕的特点：外观发红充血、质硬、高于皮面1cm以上，瘢痕增生局限于皮损区，局部伴瘙痒或疼痛等不适。瘢痕处于增生活跃期，患者无结缔组织疾病或可能影响结缔组织代谢的疾病，无心、肺、肝、肾等慢性疾病，6个月内未使用类固醇激素类药物、抗肿瘤药物等，且未曾接受放疗者。采用组织块法进行原代培养。实验所用为3～5代的人增生性瘢痕成纤维细胞。在倒置相差显微镜下观察细

7、胞形态。　　1.2.2三七总甙干预人增生性瘢痕成纤维细胞实验分3组：空白对照组、400μg/mLPNS给药组、800μg/mL9PNS给药组。取第4代人增生性瘢痕成纤维细胞，将细胞按常规方法消化，调整细胞密度为1×105/mL，分别接种于3块含盖玻片的6孔培养板中，进行细胞爬片，8h后更换培养液，空白对照组加入新配制的10%小牛血清DMEM培养基，400μg/mLPNS给药组加入终浓度为400μg/mL的三七总甙，800μg/mLP