羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞nf-κb的表达影响

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1、南昌大学硕士学位论文羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞NF--κB的表达影响姓名：袁源申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：廖立新20120604摘要病理性瘢痕严重影响美观、功能，降低患者生活质量，因此科研工作者长期以来试图采用多种办法治疗病理性瘢痕，包括药物、手术、压力、放射等等，但仍未取得满意的疗效。我们实验组致力于寻找比较满意的防治办法，在前期研究基础上，继续探索羟基喜树碱对另一转导通路NF—KB的影响。目的：拟通过羟基喜树碱(hydroxycamptothecin，HCPT)对人增生性瘢痕成纤维细胞(h

2、ypertrophicscarfibroblastsHSFB)进行培养干预，检测成纤维细胞NF—KBp65、IKBQmRNA及蛋白表达，以期了解羟基喜树碱在增生性瘢痕成纤维细胞中对NF-KB转导通路的影响。方法：标本取自我院整形科患者(伤后5月)，采用组织块和组织块消化培养法，体外培养成纤维细胞第4．8代后，分为4组，空白对照组，加入成纤维细胞无血清培养基；实验组：加入含有成不同浓度羟基喜树碱(125、250、500ng／m1)无血清培养基作用培养24小时。采用逆转录．聚合酶链反应(RT．PCR法)检测NF—KB

3、p65、IKBQmRNA表达，蛋白印迹法(Western．blot)法检测NF—KBp65、IKBQ蛋白表达。结果：1、各浓度羟基喜树碱作用24小时后NF—KBp65、工KBQmRNA表达灰度比值为：500ng／ml组(O．7904-0．038、0．664+_0．086)，250ng／ml组(0．562±0．051、0．762±0．067)，125ng／ml组(0．268±0．032、O．870±0．051)，空白组(0．104±0．032，0．974±0．039)，各组差异有统计学意义(P<0．05)；NF—K

4、Bp65、IKBQmRNA灰度比值两两比较也有差异(P<0．05)。实验结果表明，各浓度(125、250、500ng／mL)羟基喜树碱作用后增生性瘢痕成纤维细胞NF—KBp65mRNA表达升高、IKBQmRNA表达降低。2、各浓度羟基喜树碱作用24小时后NF—KBp65、IKBQ蛋白表达灰度比值为：500ng／ml组(0．765±0．023、0．555±0．021)，250ng／ml组(0．593±O．015、0．736±0．016)，125ng／ml组(0．455±0．012、1．060±0．033)，空白组(

5、0’314±0．016，1．093+0．021)，各组差异有统计学意义(P<0．05)；蛋白表达水平灰度摘要比值两两比较也有差异(P<0．05)。实验结果表明，各浓度(125、250、500ng／mL)羟基喜树碱作用后增生性瘢痕成纤维细胞NF-KBp65蛋白表达升高、IKBQ蛋白表达降低。结论：羟基喜树碱可能通过减少IKBQ表达，从而促进NF—KB1365表达，影响瘢痕形成。关键词：羟基喜树碱；NF．KB；IKB；瘢痕；转录因子；阻断药物ABSTRACTHypertrophicseal"(HS)isseverel

6、yaffectedpeople，Sappearanceandfunction，reducingthequalityoflife．SoresearchershavelongtriedtouseavarietyofsolutionforthepathologicalSCar,includingsurgery,drugs，radiation，pressure，andSOon．Butthereisstillnotsatisfactorycurativeeffect．Onthebaseofthepreviousstudie

7、sof10-hydroxycamptothecinonhumanhypertrophicSCarfibroblasts，wecontinuetoexplorethemechanismofHCPTonNF—r,BexpressionofhumanhypertrophicSCarfibroblasts．objective：InordertounderstandthemechanismofHCPTontreatscar,thisstudyobservedtheeffectsofHCPTonNF-rd3expressio

8、nofcelltranscriptionfactor．Methods：HSobtainedfrompatientswhoreceivedplasticsurgery,andthenhypertrophicscarfibroblasts(HSFB)wereculturedinvitrousingtissueculturemethod．HSFBWasintervenedbyH