农杆菌介导的双价抗虫基因PtaCrylAc番茄的遗传转化研究

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1、吉林农业大学硕士学位论文农杆菌介导的双价抗虫基因Pta-CrylAc番茄的遗传转化研究姓名：杨俊杰申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：宋述尧20060401农秆菌介导的双价抗虫纂因pta—GrylAc番茄的遗传转化研究摘要本研究优化了番jI枉的再生体系和农杆菌介导的番茄转化体系，并构建了应用于农枵萤余嚣法籍健戆双馀拣虫载俸西勰BI矗3s00咱t—pta，跌蚕蘩黠系澈cro一善。魏荛誊孝粒进行了菊茄转纯、转化番茄的分子嫩物学鉴定以及遗传学分析，并初步进行了转基因番茄的抗斑鉴定工作，主要结果如下

2、：l优化了农杆菌介导番茄转化的几个影响因素；①外檀体长度在5硼左右有利于愈痿缝绫的影或；⑦毙照培养溅麓培养受有秘予愈痿组织翡形成；③农辑蔼镘染时间为8—10分钟；④菌液浓度O隗。约为O．15；⑤侵染液pH=5．2；@乙酰丁香酮使用浓度为50∥Ⅲ01／L：⑦共培养时间为三天时获得了最高的转化效率；⑧选雳羧苄毒霉素必耱菌裁，浓发淹300璎g／l；◎戬弦l传为选择裁辩戆浓度秀4mg／l。2以pcAMBIA3300为骨架，在此基础上构建了含半夏凝集素和苏云金芽孢杆菌的双价抗虫载体，并以根癌农杆菌LBAl

3、100为侵染蘸转化番茄。并且，转化后从325个终毽髂菝褥再生獯称24椿，再叟攀为8。5篙。3对转化的24株再擞植株中进行了PcR检测、R卜PcR检测以及Southernblot检测，并且确定阳性植株为15株，转化率为62．5％。4对彳，援掾送孬了摭斑基霆＆弼庇分离分辑，缝暴簿会孟德承痰律，掰镶霹蕊蛙之比为3；l；并且抗斑基因。弼d口和抗虫基因户船共分离。5对T。械株进行了除萆剂抗性检测，抗除草剂销效成分PPT谯20mg／l。6对Tl代植株B卜l一8P-7进行了小菜蛾幼虫视步抗性鉴寇，抗虫性程度较

4、为显著，毽不阏褴辣差异较大。关键词：鬻茄，cryIAc，Pta，根绱农杆菌，遗传转化，抗虫VIT量legene鼍ict耀nsfor撖ationOfpta—CrylAcintomaloVia4删西国删切口i棚一ⅫnediationAbstr巍ctAne獭ciontregenera娃onsystem越d蠢缈幻趺r洳削咐鲫妇耐舰nsgen{esystemwasestablished讯tol瑚主o．Apian

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