农杆菌介导ip-10基因遗传转化马铃薯的研究

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1、万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：080063DissertationfortheDegreeofMasterStudyonAgrobacteriumMediatedPotatoTransformationof／P—loGeneCandidate：Supervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speeiality：DateofOraIExam1lnatl‘on．University：WanPengVice—Prof．LiKuihuaMasterDevelopmentBiologyJune，

2、2008NortheastForestry万方数据摘望摘要本论文利JtJ马铃薯微型磐为试验材料，通过1i川激索组合试验，优化了尔农303t％种的高效再分化体系。采用农杆菌介导法将IP—lO錾冈导入马铃薯基闪纽-11，并通过PCR、RT-PCR、GFP蛋白荧光检测，验址了H的魅凶【二!I转入马铃薯基凶组。p。另外，探讨了转基因植株试管薯形成的最佳条件。1．利用马铃薯脱毒试管苗茎段、叶片和薯块为试验材料，通过IAA、NAA、GA，、IBA、6．BA、ZT的不同组合，进行了再分化试验。结果表明，诱导茎段愈伤的最适培养基为：MS+IBA0．1rrl．g／L+6．

3、BA0．5mg／L，愈伤诱导率为86％；但其出芽率较低：诱导叶片再分化的最适培养基为：MS+ZT10．0mg／L+NAA0．1mg／L+GA3O．2mg／L，出芽率达150％；薯块再分化最适培养基为：MS+IAA1．Omg／L+ZT3．5mg／L，分化率为120％。2．对农杆菌侵染并通过潮霉素筛选的转基因植株，进行了护．，D基因和潮霉素磷酸转移酶基因(胛71)的PCR扩增，分别获得了276bp和602bp所需目的条带。通过进一步的RT—PER反应和6FP荧光蛋白的激光共聚焦检测，最终获得3个转基因株系。3．探讨了KT、B9、CCC等激素和蔗糖浓度对转基因

4、株系形成试管薯的影响。结果表明，当KT浓度为100mg／L，B9的浓度为150mg／L，蔗糖的浓度为8％时试管薯形成量较多，其MT／Plantlet分别为1．4，1．5和1．6，表明KT、B9和蔗糖均为转基因试管薯诱导的可选试剂。关键词马铃薯：遗传转化；IP-IG试管薯万方数据AbstractPotatominituberwasusedaSexplantinthisstudy．AefficientregenerationsystemofcultivarDongnon9303wasoptimizedbytestingdifferenthormonecomb

5、inations．AtthesametimeIP-IOgeneWasintroducedintopotatogenomewithAgrobacteriummediatedmethod．PeR,RT-PCRandGFPfluorescencedetectionWasdonetoprovethattargetgenehadbeenconformedintopotatogenome．Inaddition，thebestconditionsoftransgenepotatomicrotuberformationWasdiscussed．1．Virus-freep

6、otatoplantletsWasusedtodoregenerationtestingbydifferentIAA，NAA，GA3，IBA，6-BAandZTcombinations．TheresultsshowedthattheoptimalmediumforcallusinductionfromstemwasMS+IBA0．1mg／L+6-BAO．5mg／Landitsinductivitywas86％，butgerminationrateWaslow；乃ebestdifferentiationmediumforleavesWaSMS+ZT10．0

7、0mg／L+NAAO．1mg／L+GA30．2mg／LandtheshootinductionrateWas150％．Ontheotherhand，theoptimaldifferentiationmediumfortuberdiscWasMS+IAA1．0mg／L+ZT3．5mg／Landthedifferentiationratereachedl20％．2．TransgenicplantswhichwereobtainedbyAgrobacteriuminfectionandhygromycinselectionwereperformedtoPCRa

8、mplificationof／P一10andhygromyeinphosphor