农杆菌介导的海岛棉转bt基因遗传转化研究

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1、＊分类号：：Ｑ７８学校代码１０７５８密级：公开学号：１２３１０２００１１ｆ杂ｆ《寺乂＃．－治１硕古学位论文為艇Ｖ；－农杆菌介导的海岛楠转饼基因逸传转化研究，Ｓｔｕｄｏｎｒｏｂａｃｒｉｕｍ－ｙＡｔｅｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓｍｅｄｉａｔｅｄｇＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆ巧／Ｇｅｎｅｉｎ化ＳｅａＩｓｌａｎｄＣｏｔｔｏｎ（Ｇｏ削少／７／Ｍ／ｗ４苗ｒｂａｄｅｎｓｅ－著ＢａＬ．／）研究生姓名Ｔ喜莲导师姓名及职称陈全家教４受合作导师姓名及职称曲延英

2、教４蔓学位口类紋别理学硕壬专业名称生物化学与分子生物学研究方向棉花基因工程寺所在学院农学院＇．，？，．、－■．＂？乌鲁木齐－新疆’二０—五年六月％＾‘＾、‘．＾７．缸作？茲；巧ｒ读衝，句赵篇独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加示往和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得新疆农业大一学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对

3、本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研巧生签名：了时间：Ｗ年《月巧曰关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目日：新疆农业大学有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文’档，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进巧检索，可公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）於！奸（月曰研究生签名：了时间：导师签名

4、：时间：从晚（月曰本文是转基因生物新品种重大专项课题的部分研究成果（项目编号：2013ZX008005-008）课题主持人：曲延英（新疆农业大学）农杆菌介导的海岛棉转Bt基因遗传转化研究摘要本研究首先以海岛棉DJ-1（373）、天长2号（376）、5917（380）、阿长-599（381）、塔07-152（383）、S0717（408）6个品系的下胚轴为外植体，建立了一个通用的海岛棉再生体系；并在此基础上以新海14号和新海33号为材料，对海岛棉转Bt基因遗传转化体系进行优化研究，对获得的转基因植株采用嫁接的方法以提高定植成活率；对获得的10株转基因

5、植株进行分子检测，初步确定Bt基因已整合到两个海岛棉品种的基因组中。结果如下：以6个海岛棉品系的下胚轴为外植体，通过双因素随机区组设计的方法筛选出的两组最佳激素组合，诱导出愈伤组织，并成功获得再生植株。研究结果表明：在愈伤组织分化培养基中加入0.1mg/L2,4-D和0.1mg/LKT，海岛棉380、383和381的出愈率最高且状态较好，在愈伤组织分化培养基中加入0.3mg/LNAA和0.1mg/LKT，海岛棉373、376和408可获得高质量的愈伤组织；将新挑出的初生性胚性愈伤组织与已获得的其他品系的胚性愈伤接种到同一个培养瓶中，可提高此棉花品系的胚

6、性愈伤组织出愈率；将其接种于含有0.1mg/LKT和0.05mg/LIBA的培养基中可促进体细胞胚胎的发生和成熟，利用畸形苗的培育可提高体细胞胚胎和再生植株的发生率，6个品种在6-8个月内均能获得再生植株，建立了一个通用的海岛棉再生体系，在一定程度上打破了基因型的限制。以新海14号和新海33号为研究材料，对海岛棉转Bt基因遗传转化体系进行优化研究，获得转基因植株。研究结果表明：预培养10d左右的胚性愈伤组织用农杆菌侵染15min，共培养24h后，转入抗生素筛选培养基（50mg/L卡那霉素+500mg/L头孢霉素），挑选出抗性胚性愈伤组织。在抗性体细胞胚

7、胎分化培养基中调节硝酸盐浓度，添加3.8g/LKNO3和0.55g/LNH4NO3有利于体细胞胚胎的成熟，在很大程度上提高体细胞胚的发生率；在成苗培养基中将MS大量减半，有利于正常转基因苗的萌发和发育，降低畸形胚的发生率。对嫁接成活后的转基因植株进行PCR分子检测和GUS组织化学检测，初步确定外源Bt基因稳定存在于转化体基因组中，获得的10个转基因植株均为阳性转基因植株。关键词：海岛棉；再生体系；植物激素；Bt基因；遗传转化IStudyontheAgrobacteriumtumefaciens-mediatedTransformationofBtGen

8、eintoSeaIslandCotton(GossypiumBarbadenseL.)Abst