正常和化学性CCl4损伤大鼠肝细胞的离子通道特性及药物的干预作用

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1、华中科技^学同济医学院·博士学位论文鞠螽急性翳撰饶的病因缀多，如缺氧／褥灌、滔精、瘸毒感染、哮{毒察脓毒瘘等，萁辊涮稷为复杂，～救霹分为讫攀往帮免疫饿脬损痨。嚣者耋要通过细胞色素P450及II相结合反应产生谢毒的代谢产物，使细胞麒完整性改变，线粒钵功能失调，继麓晦离子浓度改变，激活蹲解酶秘爨鞋{基

2、!}誊产生等；惹嚣主要翁贫导貔肖龋麓透子、NO、{}髂等。各种病豳引起的肝病及某些有毒物质所致的肝损伤，均可能具肖肝细脆炎症，坏死，蔫继发纾维纯救癀瑾特缝，骶纾维纯楚迸～步良翳硬纯发餍鹩主要孛褥环节。该过程～遑被触发溲可形戒自身聪性循丽，导致肝实质细

3、胞变性、坏死，肝小叶锚构破坏、纤维化，直至肼功能减退及门脉高压懿形痰。嚣魏大量翦基娥懿l融寒研究都集中于阐明艇损伤豹枫镶及寻我有效翁淤治捺摊。近年来隧着医学分子生物学技术豹成用，在薜援伤的细胞、生化、免疫和分子机制方面的研究取得了较大的进展，这将有助于防涂东乎趋提亵。迄今，关子嚣缨麓熬多静离子逶遘特彀在誉蠹乡}掇j莛较少，特嗣是对受损湃细胞豹离子通道的变纯及其药物干鞭机制的研究潲未见报道。cc毽是经典波器毒蛙锯骧，关于它对离谗爵续戆、在俸翳襄斡损伤撬镧有较为详鲡的研究f{t羽，俏缺少其电生溅机制的报道f3】。为此，本实验拟用全细胞膜片钳技术，结

4、合形态学、生物化学方法，磷究正鬻及CCI,撰伤懿大鼠瑟缀照钙逛滚(懿{e鲢e)、镩毫滚(螽lbIK；)的特性及其变化，并角药物(如粉防己碱、海葵毒豢)进行干预，从电生趟的角度阐明肝损伤的离子机制，以及药物保护受损斛细胞的离子机制，为磅裁毒效懿鲜舔护葵提供囊资辩稻可爨附瑾谂壕攥。华中科技大学嗣济医学院·博士学位论文势考文懿1．BergerML，确a髓H，CombesB，EstabrookRW．CCl4-inducedtoxicityinisolatedhepatocytes：Theimportanceofdirectsolventinjury．H

5、epatology1986；6：36—452．PerrisoudD，FeStaB．Hepaticpharmacology：mechanismsofanionandclassificationofantinecrotichepatoprotectiveagents．Tips1982；29：371。3763·ThalhammerT，KaschnitzR，MittermayerK，HaddadRGrafJ．Organicsolventsincreasemembranefluidityandaffectbileflowand站transport法rat

6、liver,BiochemPharmacolt993．46：1207。12152华中科技人学同济医学院·博士学位论文第一郝分大鼠器缨麓麓分离离体大凝藤代翳缓飚鼹予药理学、鹫鼹学、生物化学及致瘥{擘飚等研究商诲多饶点，在这些领域中应雳离体大鼠野绥麓邑菲常善遍。肝细胞的分离方法包描机械分离法和酶分离法两种。机械分离法是利怒物理方法耀脬缨胞与脬蠹结缭缎织及Glisson鞲等分离。其优点魁操作麓攀，戎奉懿帮掰分离斡黔缀夔簇上浆簧囱蒺残势毪鼷不荔发生改变。但谚法所得细胞产量低，活性麓，已逐渐被酶分离法所替代。多种蛋囱水解酶可用于分离脬鳃艟，其中胶原酶最鬻

7、怒。胶愿酶分离法对翳缨跑搬娥损伤较小，产鬣较高，也糍较完整建深存翔鼹貘上弱蚕囱震。毽酶法搽作条件严格，酶制荆价格昂贵。本实验在Seglen[1J分离肝细胞方法的綦础上，邀牙改进，褥戮懿大鼠脬缨艇腿膜完整、平港、光港凌好，可供黢雉榭实验霜。1．1材辩狡原簿l、DMEM塔蓉蒸，Sigma{谷氨酸镯，Gibco；萁翘试裁均为分析纯。无ea2+、M孑+静Hanks’"溺f(mmot-12"‘)：NaCtt37；KCI5．4；NaH2P048．5；Na2HP040．58；NaHC034，16；Glucose5．5：瘸NaOH键pH至7，2—7+4。过'撼

8、后，纯氧饱和。含5retool，L4cf+黪Hanks’滚为在上述液萍中热入5mmo!t己一each。KB滚(mmot·L-5)：Glutamicacid70；Taurine15；KCl130；K妫p0410；HEPES10；MgCl20．5；Glucosell；EGTA0,5。用KOH调pH至7．2m7．4。是毒l灌滚装置：共分二屡。土层为含零浴夹罄的玻璃瀑尊，臻予盛敕潦流液及通氧。下层为长发30cm、内径gnun含水浴夹层韵玻璃冷凝管。3华中科技火学同济医学院*博士学位论文1F屡崮VI楚竣控籀流速黪羚躲摇管。整套装嚣与蓬瀑承滏装萋柱运。实验

9、动物：Wistar大鼠，雌雄不拘，体霞200+_259，由华中科拽大学阎济医学院实验动物中心提供。1。2寿法动物的麻醉和解俐成年Wistar大鼠用戊巴