半胱氨酰白三烯受体基因mRNA表达水平与小儿哮喘的关系

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1、吉林大学硕士学位论文摘要白三烯受体拮杭剂作为新型杭哮喘药物在临床广泛应用，它通过竞争性抑制LTs与其受体结合发挥治疗哮喘、控制哮喘的作用。对哮喘相关基因、基因多态性的研究已成为当今世界科研领域的热点。目前认为，白三烯(LTs)是哮喘发病过程中最重要的炎性介质，LTs通过与其受体结合产生广泛而多样的生物学效应，这一观点已经被美国及日本的实验室所验证.白三烯受体基因已经通过分子生物学方法在动物模型上得以表达。本研究检测了白三烯受体基因mRNA在儿童外周血白细胞中的表达;对比了白三烯受体基因mRNA在哮喘组和健康对照组之间表达水平的差异;研究轻

2、、中、重度哮喘患者白三烯受体基因mRNA表达水平足否存在不同;以及性别和年龄因素对白三烯受体基因mRNA表达水平产生的影响。在分子水平上阐明哮喘的发病机理，探讨哮喘基因治疗的可能性。本研究以93例哮喘发作期患儿和72名健康儿童为研究对象。抽取外周血，分离外周血白细胞，提取mRNA，引入内参0-actin,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR技术)对目的基因片断进行体外扩增。将RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳。运用电泳凝胶定位分析仪，1D凝胶分析软件，对比并定量分析CysLT,-Receptor和CysLTZ-Receptor基因mRNA在

3、哮喘组和对照组之间的差异，求得LTs-receptor/P一‘tin比值.应用SAS6.12统计学分析软件，对所的数据进行统计学处理.结果显示在哮濡组及对照组儿童外周血白细胞中，CysLT,-Receptor和CysLTZ-Receptor基因mRNA均存在表达;在哮喘组中CysLTZ-Recepto:及CysLTZ-Receptor基因mRNA表达吉林大学硕士学位论文水平较对照组显著增高(P均<0.05)，数据分析具有统计学意义;轻、中、重度哮喘患儿外周血白细胞白三烯受体基因mRNA的表达水平无显著性差异(P均>0.05);性别和年龄因

4、素对儿童哮喘轻、中、重度无显著性影响，对CysLTI-Receptor和CysLT2-Receptor在外周血白细胞的，nRNA表达无显著性影响。对哮喘组白三烯受体基因mRNA表达无显著性影响(P均>0.05).故白三烯受体基因mRNA表达强弱与哮喘的发病有关;轻、中、重度哮喘患)L对白三烯受体拮杭剂的敏感性应该是相同的;哮喘的轻、中、重度与白三烯受体基因mRNA的表达无关;白三烯受体基因mRNA表达强弱与哮喘的临床轻、中、重度无关;性别和年龄因素对白三烯受体基因表达无显著影响。LTs是脂性炎性介质，是炎症反应和过敏反应的漫反应物质。LT

5、s与其受体结合发挥广泛而多样的生物学效应，可引起支气管平滑肌收缩，血管通透性增加，促进炎症细胞在气道的聚集以及多种细胞因子、炎症介质的释放。哮喘患儿白三烯受体表达增多，LTs与白三烯受体结合机会增多，导致哮喘的发生和发展。CysLTI-Receptor基因位于人类Xg13-Xg21，为G一蛋白偶连受体，计算机上的分子量为38549，具有7次膜贯通结构，通过细胞内Cat+}-高发挥其生物学效应。CysLTI-Receptor的mRNA在人类肺平滑肌细胞、组织巨噬细胞.PBMC和Et)S中存在表达。其cDNA序列已经明确，1014bp,337

6、aa。目前，应用于临床的均为受体1选择性拮杭剂，如(montelukast,zafirlukast)aCysLTI-Receptor被白三烯(如LTD4)激活，引起平滑肌细胞收缩及增生、粘膜水肿、吉林大学硕士学位论文EOS聚集、粘液分泌增多，从而直接导致哮喘的发生和发展。CysLT2-Receptor基因位于人类l3g14，该区域与特应性哮喘相关联，该观点已被美国和日本的两大实验室研究并证实。CysLT2-Receptor为G一蛋白偶连受体.通过细胞内Cat}升高发挥其生物学效应。其cDNA序列含有10416p,346aa，其中38%的a

7、s与受体1相同，可被白三烯(LTC4.LTDOLTE4)激活，可抵杭CysLT,-Receptor选择性拮杭剂的生物学作用。CysLT2-Receptor能被CysLTI-Receptor/CysLT2-Recepto:双向拮抗剂如BAYu9773竞争性抑制.CysLT2-Receptor的mRNA在肺间质巨噬细胞、气道平滑NL细胞、心脏浦肯野纤维细胞、肾髓细胞、外周血白细胞(主要为淋巴细胞)及脑组织中存在表达，在支气管平滑肌细胞表达较弱，在接近支气管平滑肌细胞的巨噬细胞表达增强123--231。基因表达调控受转录水平的影响，核普酸编码遗

8、传信息的差异，决定了白三烯受体在个体表达水平的不同。哮喘组外周血白细胞白三烯受体基因mRNA在转录水平的增高，间接说明白三烯受体基因表达水平的增强，LTs与其结合发挥炎症介质作用强于正常对照组