半胱氨酰白三烯及cvslt1受体介导转化生长因子β1对星形胶质细胞的调节作用

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1、浙江大学博士学位论文半胱氨酰白三烯及CvsLT1受体介导转化生长因子β1对星形胶质细胞的调节作用姓名：黄雪琴申请学位级别：博士专业：药理学指导教师：魏尔清20120525浙江大学博士学位论文中文摘要半胱氨酰白三烯及cysLTl受体介导转化生长因子1311对星形胶质细胞的调节作用浙江大学医学院药理学博士研究生黄雪琴导师魏尔清教授摘要研究背景：脑缺血后的炎症反应在其病理生理发生过程中起了重要作用。脑缺血损伤发生后，促进外周和中枢神经系统的促炎症因子表达并分泌至细胞外，诱导脑内炎症变化，其结果之一是激活星形胶质细胞并逐渐形成胶质疤痕，研究炎症因子激活星形胶质细胞，有助于了解胶质疤痕

2、形成机制和干预途径。脑缺血后脑内炎症因子包括转化生长因子pl(trallsfo肌inggro、砒fIaCtorp1，TGF-p1)以及半胱氨酰白三烯类(cysteinylleukotrienes，cysLTS)。TGF．p1被广泛认为是一种与损伤相关的细胞因子，CysLTs是一类重要的炎症介质，两者在脑缺血、脑外伤等中枢神经系统损伤性疾病发病中均起重要作用。TGF．B1在正常脑组织中表达水平不高。脑缺血后，TGF．p1mRNA在脑组织中早期(缺血后6h)表达增加，缺血后2~4天达高峰，持续14～26天；缺血早期在全脑弥散表达，7~14天后主要表达于星形胶质细胞，与脑缺血后胶质

3、疤痕的形成有关；体外实验表明，TGF．B1能够诱导星形胶质细胞增生肥大；促进星形胶质ll浙江人学博_上学位论文中文摘要细胞迁移。CysLTs由5．脂氧合酶(5．1ipoxygenase，5．LOx)催化花生四烯酸而形成，其作用通过半胱氨酰白三烯受体(cysteinylleukotrienercceptor，CysLT受体)起作用，该类受体主要包括CysLTl和CysLT2受体两种亚型。CysLTl受体在正常脑组织中表达水平不高。脑缺血后，缺血中心区CysLTl受体mIⅢA在缺血再灌注3、6、12h和7、14天表达上调；缺血周边区，再灌注后3天内CysLTl受体mRNA水平没有

4、变化，7、14天明显增高，主要表达于增生的星形胶质细胞。药理学研究表明，CysLTl受体抑制剂p啪lukast抑制小鼠局灶性脑缺血后诱导的胶质疤痕形成。在大鼠星形胶质细胞，轻度缺氧缺糖(oxygen．glucosed印rivation，OGD)诱导CysLTI受体表达，并介导体外星形胶质细胞的增殖、激活；而CysLT2受体则介导中度OGD诱导的星形胶质细胞损伤。CysLTl受体介导星形胶质细胞激活的机制尚待阐明。由于星形胶质细胞激活受多种因素调节，CysLTl受体的效应可能与其他因素存在相互作用．在外周组织中，TGF．pl能上调支气管平滑肌细胞中CysLTl受体的表达，增强L

5、TD4的促增殖作用；TGF．D1能上调胎儿肺成纤维细胞中CysLTl受体的表达；TGF．D1能增加树突状细胞中5．LOx和5．LOx激活蛋白(FLAP)的表达，增加白三烯的合成。而在中枢神经系统中，TGF．pl与CysLTS及其受体之间是否有相互调节的作用?如何调节?尚待阐明。尤其对星形胶质细胞激活，TGF．pl与CysLTl受体的相互作用，是本文拟阐明的问题。研究目的：本文拟观察半胱氨酰白三烯及CysLTl受体与TGF—Dl在调节星形胶质细胞中的相互作用，进行以下几个方面的研究：1．首先，阐明CysLTl受体是否与TGF．p1相互作用。观察TGF．p1以及CysLT受体相关

6、药物对细胞活性的影响，包括5．LOX抑制剂、CysLTl和CysLT2受体激动剂和拮抗剂。2．其次，进一步阐明TGF．D1与CysLTl受体之间的可能相互作用。重点观察¨I浙江大学博J：学位论文中文摘要TGF．D1与CysLT受体激动剂、拮抗剂及siRNA对星形胶质细胞激活的作用，包括对增殖和迁移作用的影响．3．然后，为了阐明TGF．p1与CysLTl受体之间的相互作用特点，从两个方面进行解析，一方面分析TGF．pl对CysLTl受体及其内源性激动剂CysLTs合成酶5．LOX的调节作用；另一方面，分析cysLTl受体激动剂对TGF-p1的调节作用．4．最后，为了阐明TGF—

7、pl与CysLTl受体之间的相互作用的意义，在以往轻度OGD(1h)增强cysLTl受体表达及效应结果的基础上，观察轻度oGD是否增加TGF．Dl释放。研究方法：选用原代培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞作为细胞模型，细胞划痕方法检测细胞迁移；MTT还原试验法检测细胞活性；流式细胞术检测细胞的增殖；细胞免疫化学法检测细胞中5．LOx的核膜移位；ELISA法检测CysLTs释放；RT-PCR、’weSt锄blot和细胞免疫荧光法检测细胞中5．LOx、CysLTl受体和cysLT2受体表达。以CysLT受体非选