半胱氨酰白三烯受体在大鼠分泌性中耳炎黏膜中的表达

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1、半胱氨酰白三烯受体在大鼠分泌性中耳炎黏膜中的表达【摘要】　　目的探讨半胱氨酰白三烯受体（CysLTR）1、2在变应性分泌性中耳炎黏膜中表达及其变化。方法建立卵白蛋白激发变态反应中耳炎大鼠模型。实验动物分为阴性对照组Ⅰ、阴性对照组Ⅱ和实验组，采用半定量反转录聚合酶链反应（RTPCR）技术分别检测半胱氨酰白三烯受体CysLTR1、CysLTR2mRNA在中耳黏膜的表达变化。结果CysLTR1、CysLTR2mRNA在阴性对照组Ⅰ、Ⅱ的中耳黏膜表达很低，炎症情况下两型受体在实验组中耳黏膜的表达均显著增高,相对值分别为（0.42±0.05）和（0.28±0.06）,与阴性对照组Ⅰ、Ⅱ比较差别

2、有统计学意义（P<0.01）。结论CysLTR1、CysLTR2均在中耳黏膜表达，变应性炎症时表达明显上调。【关键词】中耳炎，伴渗出液；半胱氨酰；白三烯类；受体，白三烯；白三烯拮抗剂；聚和酶链反应　　ABSTRACT:ObjectiveTodeterminetheexpressionsofcystEinylleukotrienereceptors,CysLTR1andCysLTR2,inaratmodelofotitismediain(OVA).MethodsEIghteenSpragueDaentalgroup,negativecontrolⅠandⅡ).Ratsfromthee

3、xperimentalgroupucosasRNAexpressionsbysemiquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction.ResultsThemRNAexpressionofCysLTR1andCysLTR2iddleearmucosasofthenegativecontrolgroupsandsignificantupregulationiddleearmucosaandcanbemodulatedimmunologically.　　KEY_053641）、CysltR2基因（基因号：NM_133413）、G

4、APDH（基因号：X02231）用DNAMAN4.0程序设计如下：　　CysltR1基因引物序列　　上游:5’TGTGGGTTTCTTTGGCAATAG　　下游:5’GTTTGTTTGTCCTGTGGAGGC　　CysltR2基因引物序列　　上游5’CCTATTCATAAGCACCCTGCC　　下游5’CCAAGTGGATGGTCCGAAGT　　GAPDH基因引物序列　　上游5’GCTGGTGCTGAGTATGTCGT　　下游5’GAATGGGAGTTGCTGTTGAA　　1.3.2.3RTPCR按照Invitrogen公司一步法RTPCR试剂盒（SuperScriptOn

5、eStepRTPCRTaqkit）说明书，在冰上依次加入12.5μL2×buffer，2.0μL总RNA，0.5μL正向引物，0.5μL反向引物，0.5μLssRT/Taq酶混合物，9.0μLDEPC水，总体积为25μL。在PE2400DNA扩增仪上进行RTPCR:50℃30min合成cDNA，94℃2min预变性并活化PlatinumTaq，之后按94℃30s→55℃30s→72℃45s，进行36个循环的扩增，最后72℃延伸7min。RTPCR产物用1.0%Agrose电泳分离鉴定。　　1.3.2.4半定量分析　　电泳结果经GeneSnap（SynGene,Version5.0

6、0.09）成像后用GeneTools（SynGene,Version3.00.22）进行半定量分析。以曲线下峰面积作为PCR产物含量，用目的基因与同一标本内参照基因（GAPDH）积分值之比，表示该基因mRNA相对表达水平。　　1.4统计学处理　　数据以x±s表示，采用SPSS10.0单因素方差分析统计方法，P<0.05为差别有统计学意义。　　2结果　　2.1耳窥镜及组织学检查　　2组阴性对照组所有大鼠鼓膜色泽基本正常，标志清楚，鼓室黏膜基本正常；实验组鼓膜内陷、混浊，有不同程度充血。解剖显微镜下观察可见，实验组大鼠鼓室黏膜水肿明显,可见少量淡黄色积液。组织学切片显示，实验组与阴性对照

7、组比较可见鼓室黏膜明显增厚，黏膜下有较多炎症细胞浸润（图1）。　　2.2RTPCR结果　　将提取的总RNA在紫外分光光度仪下测其吸光度（A）值，各样品的OD260/OD280均>1.7，表明提取的RNA纯度符合要求，1％琼脂糖凝胶电泳可见明显的18S和28S两条带，表明RNA完整性好。预期的目的基因CysLTR1、CysLTR2片段长度分别为440bp和560bp，从实验组和阴性对照组Ⅰ、ⅡCysLTR1、Cys