半胱氨酰白三烯受体在大鼠分泌性中耳炎黏膜中的表达

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时间:2018-11-24

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1、半胱氨酰白三烯受体在大鼠分泌性中耳炎黏膜中的表达【摘要】  目的探讨半胱氨酰白三烯受体(CysLTR)1、2在变应性分泌性中耳炎黏膜中表达及其变化。方法建立卵白蛋白激发变态反应中耳炎大鼠模型。实验动物分为阴性对照组Ⅰ、阴性对照组Ⅱ和实验组,采用半定量反转录聚合酶链反应(RTPCR)技术分别检测半胱氨酰白三烯受体CysLTR1、CysLTR2mRNA在中耳黏膜的表达变化。结果CysLTR1、CysLTR2mRNA在阴性对照组Ⅰ、Ⅱ的中耳黏膜表达很低,炎症情况下两型受体在实验组中耳黏膜的表达均显著增高,相对值分别为(0.42±0.05)和(0.28±0.06),与阴性对照组Ⅰ、Ⅱ比较差别

2、有统计学意义(P<0.01)。结论CysLTR1、CysLTR2均在中耳黏膜表达,变应性炎症时表达明显上调。【关键词】中耳炎,伴渗出液;半胱氨酰;白三烯类;受体,白三烯;白三烯拮抗剂;聚和酶链反应  ABSTRACT:ObjectiveTodeterminetheexpressionsofcystEinylleukotrienereceptors,CysLTR1andCysLTR2,inaratmodelofotitismediain(OVA).MethodsEIghteenSpragueDaentalgroup,negativecontrolⅠandⅡ).Ratsfromthee

3、xperimentalgroupucosasRNAexpressionsbysemiquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction.ResultsThemRNAexpressionofCysLTR1andCysLTR2iddleearmucosasofthenegativecontrolgroupsandsignificantupregulationiddleearmucosaandcanbemodulatedimmunologically.  KEY_053641)、CysltR2基因(基因号:NM_133413)、G

4、APDH(基因号:X02231)用DNAMAN4.0程序设计如下:  CysltR1基因引物序列  上游:5’TGTGGGTTTCTTTGGCAATAG  下游:5’GTTTGTTTGTCCTGTGGAGGC  CysltR2基因引物序列  上游5’CCTATTCATAAGCACCCTGCC  下游5’CCAAGTGGATGGTCCGAAGT  GAPDH基因引物序列  上游5’GCTGGTGCTGAGTATGTCGT  下游5’GAATGGGAGTTGCTGTTGAA  1.3.2.3RTPCR按照Invitrogen公司一步法RTPCR试剂盒(SuperScriptOn

5、eStepRTPCRTaqkit)说明书,在冰上依次加入12.5μL2×buffer,2.0μL总RNA,0.5μL正向引物,0.5μL反向引物,0.5μLssRT/Taq酶混合物,9.0μLDEPC水,总体积为25μL。在PE2400DNA扩增仪上进行RTPCR:50℃30min合成cDNA,94℃2min预变性并活化PlatinumTaq,之后按94℃30s→55℃30s→72℃45s,进行36个循环的扩增,最后72℃延伸7min。RTPCR产物用1.0%Agrose电泳分离鉴定。  1.3.2.4半定量分析  电泳结果经GeneSnap(SynGene,Version5.0

6、0.09)成像后用GeneTools(SynGene,Version3.00.22)进行半定量分析。以曲线下峰面积作为PCR产物含量,用目的基因与同一标本内参照基因(GAPDH)积分值之比,表示该基因mRNA相对表达水平。  1.4统计学处理  数据以x±s表示,采用SPSS10.0单因素方差分析统计方法,P<0.05为差别有统计学意义。  2结果  2.1耳窥镜及组织学检查  2组阴性对照组所有大鼠鼓膜色泽基本正常,标志清楚,鼓室黏膜基本正常;实验组鼓膜内陷、混浊,有不同程度充血。解剖显微镜下观察可见,实验组大鼠鼓室黏膜水肿明显,可见少量淡黄色积液。组织学切片显示,实验组与阴性对照

7、组比较可见鼓室黏膜明显增厚,黏膜下有较多炎症细胞浸润(图1)。  2.2RTPCR结果  将提取的总RNA在紫外分光光度仪下测其吸光度(A)值,各样品的OD260/OD280均>1.7,表明提取的RNA纯度符合要求,1%琼脂糖凝胶电泳可见明显的18S和28S两条带,表明RNA完整性好。预期的目的基因CysLTR1、CysLTR2片段长度分别为440bp和560bp,从实验组和阴性对照组Ⅰ、ⅡCysLTR1、Cys

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