平菇漆酶的性质和应用研究

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1、第31卷第9期2008年9月I‘诧尉铂敢求EnvironmentalScience＆TechnologyV01．31No．90ct．2008平菇漆酶的性质和应用研究杨清香，王涛，王栋，李学梅(河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007)摘要：通过采用硫酸铵分级沉淀对平菇菌种831和予6两菌种所产生的漆酶进行了初步分离，并对酶的性质进行了初步研究，研究表明它们的最适反应温度都在6【)℃，最适反应pH都在3．0，对831漆酶进行除酚和固定化脱色的研究表明，在最佳除酚条件下50℃，pH5．0，反应3h，对

2、25mg／L单宁酸的去除率可达24．4％，在所研究的不同固定化材料中。以尼龙网为材料的固定化效果最好。固定化酶对50mgL的活性艳蓝脱色率可达游离酶脱色率的76％，重复应用4次脱色率没有降低趋势，之后逐渐下降。关键词：平菇；漆酶；除酚；脱色中图分类号：Q939；X171文献标志码：A文章编号：1003-6504(2008)09-0039-03Characteris廿csandApplicationofLaccasefromPleurotus05臼蜘觚YANGQing-xiang，WANGTao，WANG

3、Dong，LIXue-mei(SchoolofLifeScience，HenanNormalUniversi哼，Xinxiang453007，China)Abstract：Using(NH4)2S04fract／onationmethod，crudeenzymeoflaccasewasobtmnedfromPleuotusostreatus831andYu．6．Characteristicsofenzymefromthetwosffainswerestudied．Resultsindicatedthat

4、theiroptimumtemperatureandpHwere600Cand3．0respectively．Crudeenzymefromstrain831coulddecompose25mg／Lpolyphenol24．4％undertheoptimumconditionof50℃andpH5．0within3h．Amongvariousenzymeimmobilizingmaterials．nylonnetwasthebestandtheimmobilizedenzymecouldeffectiv

5、elydecolorize50me；，t,KNRwithdecolorizationrateof76％within5h．Immobilizedenzymecouldkeepconstantdecolorizationactivitiesatleastin4cyclesoftest．Keywords：Pleuotusostreatus；laccase；depolyphenol；decoloration漆酶(Laccase)是一种含铜的多酚氧化酶，广泛地存在于各种植物和真菌中。自从1983年首次被发现以来，

6、漆酶一直是生物学、化学和环境科学等领域十分活跃的研究热点，在很多方面有较大的应用价值，比如木质素的降解和纸浆的生物漂白、新型传感器的研制和生物检测、环境污染物的降解、生物燃料电池的阴极反应、食品饮料中酚类物质的去除及其他潜在的应用【1。21。漆酶广泛存在于担子菌、半知菌和子囊菌中，但其中最主要的生产者是担子菌中的白腐菌。在我们以前的报道中比较了不同食用菌液体发酵产生漆酶的性质，其中以平菇产酶能力最高，培养14d时每毫升发酵液漆酶活性达到18053．31U／L[31，本研究进一步研究了平菇831和予6漆酶

7、粗酶液的性质以及在除酚和染料脱色方面的应用。1材料与方法1．1菌种和培养基液体培养基采用液体产酶培养基【41。菌种：平菇831和平菇予6为本研究组保藏的平菇生产菌种。1．2漆酶粗酶制剂的制备切取菌丝，接入产酶培养基中，于25℃条件下培养19d，所得发酵液过滤后所得上清即为粗酶液，经30％～90％的硫酸铵分级沉淀，于12000r／min离心收集沉淀，用蒸馏水和缓冲液进行透析，每隔12h换一次缓冲液至透析完全。1．3漆酶的测定．漆酶测定采用ABTS法【51，反应液在30℃条件下保温3min后在420nm处测

8、定吸光值的增加。酶液在100。C煮沸15min作为阴性对照。酶活力单位定义为反应体系中引起0．1个／min吸光度增加所需的酶量。空白对照为lmLABTS+lmL蒸馏水。结果计算，酶活=AOD／3x10(AOD指的是从0～3min吸光度值的增加)。收稿日期：2008一Ol一23；修回2008-04-16基金项目：教育部高校新世纪优秀人才支持计划(NCET-05--0612)；国家自然科学基金(20677014)作者简介：杨清香(1966-)，