平菇几丁质酶基因PoChil的克隆与分析

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1、分类号河南农业大学硕士学位论文密级英文题目：一Cloningandanalysisofchitinasegene(PoChil)一fromPleurotusostreatus导专论文提交日学位授予日河南农业大学学位论文独创性声明、使用授权及知识产权归属承诺书学位论学位文题目平菇几丁质酶基因PoChil的克隆与分析硕士级别学生学科导师申进文、戚元成、姓名段庆虎微生物学专业姓名张玉亭学位论文是否保密如需保密，解密时间年月日独创性声明本人呈交论文是在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，文中不包含其

2、他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得河南农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。特此声明。一躲似黜名：＼由醴日期：刃侈笱月必日日期：2。}声多为移日注：保密学位论文在腓后适用于本授权书．＼；孽白艺岁q研究生签名彻媲导师签名：、审幺学院领导张＼印型日期：沙隆古肖搿日日期^lJ年J贺乙日日期勋防知日舢6㈣3删6舢2删3舢4舢2删Y一致谢本论文是在导师申进文教授、戚元成副教授和张玉亭研究员的悉心指导下完成的。从论

3、文的选题、实验设计、实验过程到论文的撰写、修改，每一个环节都倾注了导师们大量的心血。导师们渊博的知识、敏锐的思维、开阔的思路、严谨的治学作风、勤奋忘我的工作作风和对科学执着追求的精神，以及宽于待人、严于律己的高尚品格，使我受益匪浅，并对我今后的工作、学习和生活产生深远的影响。在此，谨向申老师、戚老师和张老师表示我最衷心的感谢和最诚挚的敬意!感谢贾新成教授、邱立友教授、吴坤教授、陈红歌教授、麻兵继副教授、张世敏副教授、宋安东教授、刘亮伟教授、王风芹副教授、王明道副教授、刘新育副教授、高玉千老师及生命科学院教学实验中心微生物实验室的各

4、位老师在我学习和实验中给予的帮助和建议!感谢师兄王震、徐柯、决超、赵旭、周航、常路路、张朝辉、刘天翔、曹育博、孙强，师姐李燕、冯雅岚、余海尤、吴婷婷、关园园、张丹娜、孙晓萍，师弟黄千慧、陆舒冰、张广、赵帅举，师妹李芳、王瑞瑞、薛元、卢娇娇、梁思思、张雪丽、张宇，在实验过程中给予我的大力支持和帮助!感谢李会杰、史红鸽、史超文、刘巧宁、韦学博、柴冉、张明月、刘冬忍等同学在学习和实验中给予我的帮助，三年来的共同学习和生活，我们结下了深厚的友谊。在此，向你们表示感谢!感谢所有关心、支持和帮助过我的人!最后，还要深深感谢我的奶奶、父母、妹妹

5、和未婚妻，是他们无私的奉献和支持使我顺利完成了学业。谨向他们表示最衷心的感谢!段庆虎2013年5月目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1第一章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．1几丁质酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．1．1几丁质酶的分类⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．1．3几丁质酶的催化机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．1．4几丁质酶活性测定方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．1．5几丁质酶的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．1．6几丁质酶基因克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．1．7几丁质酶基因表达调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．1．8植物几丁质酶的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．1．9动物几丁质酶的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．1．10真菌几丁质酶的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51．2丝状真菌基因功能的研究方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．3食用菌转化方法研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．3．1PEG介导转化法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．71．3．2限制性内切酶介导整合法(REMI)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．71．3-3基因枪法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71-3．4电击法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．3．5农杆菌介导转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．4平菇遗传转化的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9第二章平菇几丁质酶基因的克隆与生物信息学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．102．1材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．1．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯