bt几丁质酶表达类型的检测及基因克隆和序列分析

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1、南开大学学位论文版权使用授权书本人完全了解南开大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，同意如下各项内容：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并采用影印、缩印、扫描、数字化或其它手段保存论文；学校有权提供目录检索以及提供本学位论文全文或者部分的阅览服务；学校有权按有关规定向国家有关部门或者机构送交论文的复印件和电子版；在不以赢利为目的的前提下，学校可以适当复制论文的部分或全部内容用于学术活动。学位论文作者签名：冻辛包铃口8年岁月≯’El⋯～蕴手鞲教辅惹j。奉孚位论文属手葆酊。茬⋯⋯珲解蕃后

2、适甫本授权书。指导教师签名：学位论文作者签名：沫艳铃解密时间：年月日各密级的最长保密年限及书写格式规定如下：南开大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。学位论文作者签名：产艇手色硷杪艿年赂月2；Et‘，v引言第一章引言第一节苏云金芽孢杆菌的概述全球每

3、年因病虫和植物病害造成的粮食损失占收成的20-40％。为了对付病虫害和植物真菌病需用大量的农药。迄今，对病虫害和植物真菌病害的防治主要还是采用化学农药，但化学农药的大量使用会给人类带来一系列严重问题，如浪费能源、毒害人畜、污染环境、杀伤害虫天敌、使害虫产生抗性等。而生物农药可有效的避免这些弊病。利用微生物分泌产生的毒素或各种酶来杀死病虫和致植物病害的真菌，因此广泛受到人们的重视。苏云金芽孢杆菌(简称Bt)是最常见的生物杀虫剂，它是独特的革兰氏阳性芽孢形成菌，在生长周期的稳定期形成芽孢晶体【l】。历刚开始时被认为是昆虫病原菌，并且它的

4、杀虫活性很大程度上或者完全(与昆虫有关)取决于伴孢晶体。从这一点上，引发了人们基于历的生物杀虫剂开发的兴趣，人们用它来控制某些鳞翅目、鞘翅目和双翅目种类的害虫。此外，在更多的报道中证实，历对其他种的昆虫也有活性，并且对线虫、mites、原生动物有活性。历在农业、森林管理、卫生害虫防治方面，已成为一种化学合成农药有效的替代品和补充。此外，它也是转基因植物的重要基因资源。1．1．1苏云金芽孢杆菌的研究历史苏云金芽孢杆菌在《伯杰氏细菌鉴定手册》第九版中归属为第二类第八群，革兰氏阳性，芽孢杆菌属的一个种，1901年日本的石渡(S．Ishiw

5、ata)从罹病的家蚕幼虫体内分离到此类细菌的一个变种，曾被命名为猝倒杆菌(Bacillussotto)。1911年Berliner从德国苏云金地区(Thuringen)染病的地中海粉螟(AnagastakuhriellaZeller)中分离出一种杆菌，定名为苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)，后来该菌不幸失传。1927年Mattes再次从地中海粉螟中分离出类似的杆菌，并沿用了苏云金芽孢杆菌名称，这就是现在的模式种苏云金亚种Mattes或Berliner菌株(Bacillusthuringiensissubs

6、p．thuringiensisMattesorBerliner)[21。此后世界各国又先后从昆虫体内或土壤中分离出类似的细菌，相继引言发现了对鳞翅目、双翅目(1977年)、鞘翅目(1983年)、膜翅目、同翅目(1993年)昆虫以及原生动物(1989年)、扁形动物、线虫(1988年)及蛛J[狮](1990年)有毒性的菌株，被陆续命名为苏云金芽孢杆菌的各个亚种‘3，4，51。1．1．2苏云金芽孢杆菌的杀虫物质苏云金芽孢杆菌对害虫的毒杀作用源于其在生长过程中产生的毒素。这些毒素有的是蛋白质，有的是小分子物质，有的在细菌营养生长期产生，有的

7、在芽孢形成期产生，有的分泌到细胞外，有的贮存在细胞内。目前己知的历毒素至少有6种。第1种是杀虫晶体蛋白(InsecticidalCrystalProteins，ICPs)，也称6一内毒素(delta．endotoxin)，它是历杀虫的主要毒素成分。其形态发生是在前芽孢形成的第1II阶段，即前芽孢内卷时靠近芽孢外膜处，开始形成伴胞晶体。其形态及大小多种多样，有菱形、方形和不规则形等。早期的分类方法是1989年Hoffe和Whiteley建立的，根据伴胞晶体的杀虫范围及基因序列的同源性将其分为两类：一类为Cry，在活体和离体条件下对鳞翅

8、目、双翅目和鞘翅目幼虫有毒。Cry毒素又分为如下类型：CryI对鳞翅目幼虫有毒；CryII对鳞翅目及双翅目均有毒；CryIII对鞘翅目有毒；CryIV对双翅目有毒【6】。1992年又报导了新增加的CryV和CryVI两类，其产物都是对