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时间:2019-05-14
《早期巨噬细胞激活和核因子κB活性在深低温停循环肺损伤中的作用》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、早期巨噬细胞激活和核因子-κB活性在深低温停循环肺损伤中的作用作者:高波涛,郑景浩,徐志伟,刘锦芬,苏肇伉,丁文祥【摘要】目的探讨早期巨噬细胞的激活和核因子kappaB(NF-κB)活性在深低温停循环(DHCA)肺损伤中的作用及其可能的作用机制。方法通过DHCA幼猪模型的建立,采用免疫组化和ELISA方法,检测缺血—再灌注不同时段肺组织巨噬细胞的激活、NF-κB的表达以及炎性因子含量的变化来检验巨噬细胞激活和NF-κB活性在DHCA肺损伤中的作用。结果NF-κB表达和炎性因子含量的变化与DHCA缺血-再灌注呈时间依赖性,且在DHCA缺血-再灌注1.5h时NF-κB的表达达
2、到高峰,此时肺组织的炎性细胞以巨噬细胞为主。结论早期巨噬细胞的激活和NF-κB活性可能加重DHCA肺损伤的发生。【关键词】核因子kappaB;深低温停循环;再灌注损伤 Abstract:OBJECTIVEToexploretheroleofearlyactivityofmacrophagesandnuclearfactor-kappaB(NF-κB)indeephypothermiaandcirculatoryarrest(DHCA)andalsoevaluatestheirpossibleeffectivemechanism.METHODSTwelvepiggiesw
3、ererandomlydividedintotwogroups.Thereweresixpiggiesineachgroup,normaltemperaturecardiopulmonary10bypass(CPB)andDHCA.LungtissueandvenousbloodsampleswerecollectedfromeverypigtomeassurethevirancesofNF-κBbyimmunohistochemistryandinflammatorysfactorbyELISAatthesixscheduleddifferenttime.RESULTS
4、TheexpressionofNF-κBandchangesofinflammatoryfactorhascorrelationwithtimeofischemiareperfusionandreachedtheirpeakat25hoursafterischemiareperfusion.Macrophageswerethemostabundantcellsinpulmonaryinflammatorycells.CONCLUSIONTheearlyactivityofmacrophageandNF-κBmayplayanimportantroleinlunginjur
5、yofDHCA. Keywords:Nuclearfactor-kappaB;Deephypothermiaandcirculatoryarrest;Reperfusioninjury 深低温停循环(deephypothermiaandcirculatoryarrest,DHCA)是新生儿和婴幼儿复杂先天性心脏病手术中常用的一种体外循环(cardiopulmonarybypass,CPB)技术,急性肺损伤是这些患者术后的重要并发症和死亡原因之一,然而其发生机制尚不十分清楚。我们通过建立DHCA模型,来探讨早期巨噬细胞的激活和核因子kappaB(NF-κB)活性在DHC
6、A肺损伤中的作用及其可能的作用机制。 1材料与方法10 1.1实验模型的建立健康幼猪12只,雌雄不限,体重(10.2±1.6)kg,2周龄,随机分为两组:对照组(常温并行循环组,n=6)和实验组(停循环组,n=6)。均常规行右房以及升主动脉插管,建立CPB。对照组并行循环180min;实验组并行循环30min后将体温降至22℃,然后停循环1h,之后再灌注1.5h。 1.2标本采集两组分别于并行循环前(T0)、并行循环30min(T1)、90min(停循环1h,T2)、120min(再灌注0.5h,T3)、150min(再灌注1h,T4)、180min(再灌注1.5h
7、,T5)6个时间点留取肺组织标本,用4%甲醛固定,以备做免疫组化定性测量NF-κB(LabVision公司,美国),同时抽取静脉血标本以备用。参照试剂盒(Sigma公司,美国)操作说明采用ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-8和IL-6含量。 1.2实验方法采用免疫组织化学法检测NF-κB(P65)的表达。取用4%甲醛固定新鲜肺组织标本,石蜡包埋标准切片后,二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;3%过氧化氢阻断内源性过氧化酶;0.01molTris-EDTA微波修复;非免疫性动物血清封闭非特异性抗原;NF-κ
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