深低温停循环下神经生长因子的脑保护作用研究

《深低温停循环下神经生长因子的脑保护作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、深低温停循环下神经生长因子的脑保护作用研究作者：祁泉,严勤,朱德明,蒋祖明,俞晓青,邹文艳【摘要】目的建立一种新的深低温停循环模型，研究深低温停循环(DHCA)对兔大脑皮层、海马组织中神经细胞凋亡情况，探讨DHCA下神经生长因子的脑保护作用。方法健康新西兰大白兔幼兔(0.5kg)20只，随机均分为2组：实验组（给予生长因子）和对照组（不给予生长因子）。在DHCA前、后不同时间窗监测血清S100β含量，并采用原位末端标记法(TUNEL染色法)观察和测定脑组织神经细胞凋亡的情况。对照分析两组不同时间窗S100β的变化以及神经细胞凋亡的情况。结果实验组幼兔在DHCA后神经细

2、胞凋亡数目显著减少(P<0.05)，在DHCA后30min(T2)、1h(T3)、3h(T4)、5h(T5)、12h(T6)5个时间窗血清S100β蛋白含量明显低于对照组(P<0.05)。结论给予外源性神经生长因子能明显抑制海马以及皮层神经细胞的凋亡，对深低温停循环后的神经细胞有良好的保护作用。【关键词】深低温停循环；神经生长因子Abstract:OBJECTIVEToestablishamodelofdeephypothermiecirculatoryarrest(DHCA)andstudytheneuralapoptosisinthehippocamp

3、usandcerebralcortex,investigatetheprotectiveeffectsofnervegrolydividedintoteasured．NeuralapoptosispusCA1regionandcerebralcortexofbrain．parelyanalysisthechangeofS100βandtheexpressionofneuralapoptosisinthehippocampusandcerebralcortexbetberofneuralapoptoticcellsinstudygroupS100βlevelsin(T2

4、),1h(T3),3h(T4),5h(T5),12h(T6)betpusandcerebralcortexandhasaprotectiveeffectonneuronalinjuryinducedbyDHCA.Keyiecirculatoryarrest;Nervegroiccirculatoryarrest，DHCA)能为心脏及大动脉手术提供一个无血最佳手术视野，但停循环可使全身重要器官尤其是大脑处于缺血、缺氧状态，造成一定程度上的脑组织损伤,如何预防这种损伤是近年来的研究热点。近期许多研究证明神经生长因子(nervegrol/kg)诱导后气管插管，呼吸机(Neg

5、/kg，静脉注射)及硫酸阿托品(0.02mg/kg，肌肉注射)。耳中动脉内置管，标准第二导联持续心电监测，持续监测直肠温度。1.3建立DHCA模型冰块袋包埋幼兔，物理降温，肛温降至18℃时停止降温，取动脉血做血气分析后，使体温维持在18℃左右。颈部正中切开皮肤，分离暴露双侧颈总动脉以及锁骨下动脉，用无损伤动脉夹夹闭，造成全脑缺血30min后松开动脉夹恢复脑血流灌注。用电热吹风机给幼兔复温，将体温恢复到37℃左右，维持正常体温4h后放置室温下正常饲养。1.4NGF(美国RD公司提供)处理方法实验组兔在行DHCA前48h、24h、12h、后12h分别予NGF0.5μg/k

6、g耳缘静脉注射，对照组则注射等量生理盐水。1.5标本采集与检测1.5.1血清S100β蛋白检测两组均于麻醉诱导前(T1)、DHCA后30min(T2)、1h(T3)、3h(T4)、5h(T5)、12h(T6)、24h(T7)、48h(T8)和72h(T9)取耳中动脉血，离心分离血浆于-80℃冰箱保存。采用ElISA法测定血清中S100β蛋白含量(S100β检测试剂盒由美国ADL公司提供)。1.5.2海马以及皮层神经细胞的凋亡检测两组动物术后3天，在麻醉状态下，经一侧颈总动脉插管灌注37℃生理盐水，冲洗出血管内血液，直到静脉引流出的液体变清。4℃4％多聚甲醛(150m1

7、)行颈总动脉灌注，迅速开颅取脑，取中间块放人相同固定液中继续固定24h。冠状切面切开兔脑，取出组织块行常规脱水、透明、石蜡包埋并切片，片厚4μm，将石蜡切片常规脱水，用H-E常规染色以及用原位末端标记法(TUNEL法,TUNEL试剂盒由美国CHEMICON公司生物公司提供)检测凋亡神经细胞。检测程序按试剂盒操作说明进行。TUNEL图片结果采用Axioplan2imaging显微图象分析系统医学图像分析系统进行图像分析。切片在光学显微镜高倍放大视野下随机选取脑皮层及海马各10个视野，计数凋亡细胞数目和总细胞数，计算凋亡细胞指数(凋亡细胞指数=阳性细胞数