界面光散射分析技术的开发及其在生化和药物分析中的应用

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1、西南师范大学硕士学位论文界面光散射分析技术的开发及其在生化和药物分析中的应用姓名：陆巍申请学位级别：硕士专业：分析化学指导教师：黄承志2003.1.1内容摘要界面光散射分析技术的开发及其在生化和药物分析中的应用学科专业：分析化学指导教师：黄承志教授研究方向：生物光化学分析研究生：陆巍(2000224)、oastemack等于20世纪90年代初提出的共振光散射∞$onan∞lightscatterin＆RLS)技术是一项借助普通荧光分光光度计灵敏检测聚集体光散射信号的分析技术。RLS技术因其操作简便并

2、有力克服了传统光散射技术灵敏度低和仪器条件要求严格的缺点而迅速引起了诸多研究者的浓厚兴趣和广泛关注．从1996年到现在短短的7年间，RLS技术已经广泛和成功地应用于生物大分子和药物的分析研究领域。这些研究发现，与测定生物大分子和药物常常采用的吸光光度法和荧光光度法相％RLS技术除了能获得更高灵敏度的优点外，还具有探针范围更广泛的优势q／，+本文分别以与蛋白质作用后既无明显颜色又无显著荧光性质变化的阴离子表面活性剂十二烷基苯磷酸钠(sodiumdodeeylbenzenesulfonate,SDBS)

3、和酸性三苯甲烷染料水溶性苯胺蓝(waterblue，WB)为例，成功建立了能简单，快速和灵敏地分析蛋白质的RLS方法，从而进一步证明了RLS技术在拓展分析探针方面的独特优势。。一(在pi-ii．98，离子强度为o．001时，十二烷基苯磺酸钠(sodiumdodecylbenzenesulfon‘ate．SDBS)的RLS信号能被蛋白质强烈增强，其最大散射蜂位于470．0nlTl。增强的ILLS信号与蛋白质浓度在一定范围内成正比，该方法分析蛋白质的检测限小于58．1ng／mi。该方法成功地应用于合成样

4、和尿样中蛋白质的分析。在pH2．09，离子强度为O．001时，水溶性苯胺蓝(waterblue，WB)的RLS信号能被蛋白质强烈增强，其最大散射峰位于346．0蛳。增强的RLS信号与蛋白质浓度在一定范围内成正比，该方法分析蛋白质的检测限小于1．5ng／ml。该方法成功地应用于合成样和尿样中蛋白质的分析。虽然RLS技术具有上述的优点，但依然存在着一些不足之处．例如，RLS技术还不能把待分析物的光散射信号与其共存物质的光散射信号区分开来。这就在很大程度上限制了RLS技术选择性的进一步提高。为了弥补RLS

5、技术的不足，近来，我们把RLS技术与液，液界面(1iquid／liquidinterface)上的全内反射光(totalhatemalreflectionlight)相结合，成功地开发出了全内反射共振光散射(totalinternalretiectedi℃sorlancelightscattering．TIR-RLS)技术：～种通过检测液，液界面上的RLS硬南颤蓖大学硕士论文界面光敬瓣分橱技术的嚣发厦其在生他秘药物分辑串的应搦信譬的变化檄行待分析物梭测的界面光散射技术finterracialligh

6、tscatteringtechnique)。在该授术中，待分析物通过与就它试剂结合形成双亲复合物(amphiphilicspecies)瑟吸雅夜液，液界瑶上。这样，在幽入射光于渡／液界面全反射蝣在界面上形袋黪溺渍失渡(evanescentwave)豹激发下，泼双亲复合秘缝产生显蓑增强豹RLS镶号。由于待分析物通过形成双亲复合物而吸附在液／液界面上．故很好达到了与其共存物质相分离的目的。因此，TIR-RLS技术能进一步提高RLS技术的选择性。附机3里(synergisticadsorptionmech

7、anism)和共吸附机}里(coadsorptionmechanism)，分别袋髑Eu(III)．三辛基氧纯麟(trioctylphosphineoxide,TOPO)、罗丹骥B(rhodamineB，RhB)．滇记十六烷基三甲铵(cetyltrimethylammoniumbromide，CTMAB)和吖睫橙(acrindineorange，AO)．溴化十六烷基三甲铵(cetyltrimethylammoniumbromide，CTMAB)与核酸作用以及分别采用阴离子袭面活性剂十二烷基苯磺酸钠细d

8、iumdodecylbenzenesutfonate，SDBS)、卡二靛纂蕊酸钠(sodiumdodeeylsulfonate，SDS)和十二烷基磺酸钠(sodiumlaurylsulfate,SLS)与维生紊Bl(vitaminBhVBl)作用，在水／四氯化碳(H20／CCl4)界面上进行核酸和VBl的测定。在pH8．69，离子强度为0．008时，核酸．Eu(III)和TOPO在H20／CCh界面上发生终合终焉影残三元双亲菱会携核酸．Eu(III)一TOPO。强越过