HPLC及HPLCMS分析方法的开发及其在药物分析中的应用.ppt

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1、HPLC及HPLC/MS分析方法的开发及其在药物分析中的应用2基于分离分析科学技术小颗粒填料的色谱柱以光谱、质谱技术作为检测手段专属性、分离效率及灵敏度适用于广泛的色谱应用适用于开发新方法适用于现有方法的改进HPLC及HPLC/MS法3质量源于设计（QualitybyDesign，QbD）准则实验设计方法学（DesignofExperiment，DoE）方法验证（MethodValidation）：确保方法在样品分析的一定范围内中准确、重现、可靠、耐用性。分析方法学的开发及验证4方法开发实验室获得方法及运用过程方法验证方法确认方法转移准确度，

2、精密度，专属性，检测限，定量限，线性，范围，耐用性分析条件的筛选（色谱柱,流动相,pH等）及优化（梯度、柱温、流速等）法定检验方法在使用环境中适用性评估（人员、仪器、样品、试剂）非法定检验方法在实验室之间传递的文件化过程5实验室获得方法及运用过程方法验证方法确认-用一个性质明确的物质来挑战建立的分析方法用一个确定方法来挑战现实的分析环境专属性，准确度，精密度，LOD，LOQ一般不需要进行线性，范围，耐用性实验6ICH、USP<1225>、ChPIIAppendixXIXA方法验证的内容准确度（Accuracy）精密度（Precision）-重

3、复性，重现性，中检精密度专属性（Specificity）检测限（LOD）定量限（LOQ）线性（Linearity）范围（Range）耐用性（Robustness）7方法验证-系统适用性系统适用性试验的内容在分析未知样品之前或期间，检查系统以保证系统之性能达到规定的要求塔板数，拖尾因子，分离度确定重现性（%RSD）系统适用性“样品”主组份与预期副产物之混合物系统适用性试验是色谱方法的一部分8方法验证-系统适用性容量因子k'>2精密度/进样重复性RSD1%,n5分离度Rs2(主峰与最近洗脱的色谱峰之间)拖尾因子T2理论塔板数通常N>200

4、09方法验证-USP<1225>类型1主组份或活性成份定量分析方法类型2杂质或降解化合物测定方法类型3性能特点之确定分析方法如溶出度实验类型4鉴别试验10方法验证-USP<1225>验证的内容类型1定量限度试验类型3类型4鉴别试验准确度++**-精密度++-+-专属性+++*+检测限--+*-定量限-+-*-线性++-*-范围++**-类型2*可能需要，具体与特定试验的性质有关。11如何进行方法验证分析实验阶段按照规定的实验计划或步骤通常需要3到5天在不同操作条件下，进不同浓度的试样原料及制剂皆需分析数据分析阶段对分析结果进行统计学计算色谱结

5、果是相对的用统计学分析的方法，可以客观地评估最终结果的真实变化12方法验证步骤线性Day1-3定量限检测限实验参数2Min&Max耐用性实验参数3Min&Max实验参数4Min&Max六次空白样品的基线噪音定量限精密度定量限原料药浓度4原料药浓度3原料药浓度2原料药浓度1原料药浓度5原料药精密度1-3天六次重复,100%原料药实验参数1Min&Max浓度4:120%原料及制剂浓度3:100%原料及制剂浓度2:80%原料及制剂浓度1:60%原料及制剂浓度5:140%原料及制剂13每一方法验证的过程由80到100次分析组成每次分析中，仅一种组分（

6、一个色谱峰）即可产生7个相关结果（峰面积，保留时间，分离度等……）每一组分最终得到总共约700个数字所有这些数字需要进行数学处理：手工处理（计算器，ExcelMacro’s等）专用的方法验证程序方法验证的复杂性14液相色谱的方法开发15液相色谱的方法开发根据分析物的化学性质选配色谱条件基于既往经验及思考进行合理猜测通常辅以资料参考询问同事“步进式”测试开发基于前一测试结果设计下一步的测试条件，逐步进行系统性筛选策略先按流动相pH、有机相和固定相的直接组合进行系统性筛选测试评估结果，选择最有效的条件组合再进行方法优化梯度/温度16影响分离度的因

7、素选择性最为重要MaximizedinUPLCSeparationsby:RangeofcolumnchemistriesMultipleparticlesubstratesWideusablepHrangeHighretentivityWiderangeinselectivityMaximizedinUPLCSeparationsby:Ultra-lowdispersionsystemSmall[<2µm]particlesHigherpressurecapabilityWell-designedcolumnsPhysicalChemica

8、lImpactonResolutionDoubleNDoublekDoubleα%Improvement20–40%15–20%>400%17影响分离度的因素18U