共振光散射成像分析技术开发及其在生化分析中的应用

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1、西南师范大学硕士学位论文共振光散射成像分析技术开发及其在生化分析中的应用姓名：郭宏平申请学位级别：硕士专业：分析化学指导教师：黄承志20050501西南师托k学碘l‘论文接抓光散劓成像分析技术开发及jC扎宅化分析中的冉i订共振光散射成像分析技术开发及其在生化分析中的应用学科专业：分析化学指导教师：黄承志教授内容摘要研究方向：生化药物分析研究生：郭宏平(2002399)基于光散射粒子高的光发射能力，在临床检验和生物分析、超灵敏免疫检测和DNA探针分析中进行光散射微粒标记显微成像分析已引起人们广泛关注。实验证明应用共振光散射(RLS)粒子作为标

2、记比荧光标记的灵敏度能够得到显著提高。本文在普通RLS技术的基础上，建立了一种共振光散射成像技术，可以观察到单个聚集粒子的光散射性质，通过对单个散射粒子的光散射信号检测，实现了生物大分子及药物分子的分析测定。研究内容包括下列四个方面：(1)研究了铬水解聚合物的光谱性质，并且运用共振光散射(RLs)光谱研究其与核酸的相互作用。铬聚合物在415nln和580nlTl处具有特征吸收，在350llm处具有最大荧光发射。在酸性条件下，铬聚合物与核酸作用产生强烈增强的RLS信号，其特征峰位于299．0nm，据此讨论无机聚合物试剂与生物大分子之间的作用，

3、并建立了核酸的分析方法。(2)在酸性介质中，当蛋白质存在时，四．(对磺基苯基)hi-啉(TPPS,)和四．(s．磺基噻吩)al-啉FRs—ST)P】，可以发生^聚集，从而导致增强的RLS信号，且其特征峰分别位于490．0rltn与469．0nm处。运用488nm氩离子激光光源激发溶液中的聚集粒子，在与激光光束呈直角的方向，我们可以通过普通的显微镜观察到单个聚集粒子的散射光，并且能够用～个冷却型电荷耦合装置(CCD)进行成像。对这些数字化图像进行数据分析的结果表明，在焦平面上检测到的聚集粒子个数与溶液中的蛋白质浓度成正比，据此建立了灵敏测定蛋

4、白质的分析方法，并且成功地用于人血清样品中蛋白质的测定。(3)在中性介质中，四(四一氨基苯基)hi-啉(TAPP)与肝素通过静电和疏水作用相互结合，在430．0nm处产生RLS特征峰。在441．6砌He．Cd激光线的激发下，单个TAPP-肝素聚集粒子的光散射信号可以通过普通的显微镜观察到，并且能够用CCD对其成像进行表征。数据分析表明，焦平面一定面积内的成像粒西南师范入学硕lj论文兆振光散目J成像分析技术开发及．tL：／li生化分析中的应用子数与肝素的浓度在一定范围内成线性关系，据此建立了灵敏测定肝素的方法，并成功用于肝素钠注射液中肝素含量

5、的测定。(4)在中性介质中，四．(对磺基苯基)卟啉(TPPS4)与盐酸小檗碱相互作用导致增强的RLS信号。结合微流控技术，微流通道中的聚集粒子可以通过角度化的488哪激光激发，单个TPPS4一盐酸小檗碱聚集粒子的光散射信号可以通过普通的显微镜观察到，并且能够用CCD对其成像进行表征。据此建立了一种角度化的光散射成像一微流控分析方法。数据分析表明，焦平面一定面积内的成像粒子数与盐酸小檗碱的浓度在一定范围内成线性关系，据此建立了灵敏测定小檗碱的方法，并成功用于片剂中小檗碱含量的测定。关键词：共振光散射技术共振光散射成像技术共振光散射成像一微流控

6、技术铬聚合物蛋白质核酸肝素盐酸小檗碱两商师范大学硕一I论文#振光敬剁成像分析技术开发世扎托生化竹析中的』、V用DevelopmentofResonanceLightScatteringImagingTechniqueandItsApplicationsinBiochemicalAnalysisMajor：AnalyticalChemistryResearch：BiochemicalandPharmaceuticalAnalysisSupervisor：ProfessorChangZhiHuangPostgraduate：HongPingGu

7、o(2002399)ABsTRACTBasedonthehighlight-scatteringpowerofresonancelightscattering(RLS)particles，theapplicationsofRLSparticlesashighlyfluorescentanalogsandtheirI．}seastracerlabelsinclinicalandbiologicalapplications，ultrasensitiveimmuno-andDNAprobeassayscombinedwithmicroscopya

8、ndimagingtechniqueshavebeingaddressedmoreandmoreinterests．IthasprovedthattheuseofRLSparti