小黄鱼ACE抑制肽的分离纯化鉴定及构效关系研究

《小黄鱼ACE抑制肽的分离纯化鉴定及构效关系研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、蔡丽丽小黄鱼ACE抑制肽的分离纯化鉴定及构效关系研究摘要本文以小黄鱼鱼肉为原料，酶解法制取ACE抑制粗肽，然后经过多步分离纯化鉴定小黄鱼ACE抑制肽，同时对ACE抑制五肽进行了构效关系的研究，筛选得到新型ACE抑制肽，并研究其在细胞层面上的降压机理，以期为ACE抑制肽的研究开发提供理论依据。小黄鱼鱼肉用胰蛋白酶酶解，经过响应曲面(RsM)优化，用RP．HPLC法测定得其体外ACE抑制活性，确定最优工艺条件为：pH7．0，温度50．09。C，时间16．44h，底物浓度5．57％，酶底比9．12‰。获得的小黄鱼ACE抑制多肽ACE抑制率达87．78％。以最佳酶解工艺条件下制得的小黄鱼ACE

2、粗肽为原料，进行多步分离纯化，纯化步骤依次为：超滤(截留分子量3000Da)、SephadexG25分子筛层析和SephadexG10层析，并用LC．TOFMS鉴定活性最高组分，人工合成后测定其体；'bACE抑制活性。结果为：分子量小于3000Da的肽具有高ACE抑制活性，抑制率达98．1％，分离纯化得到的组分3．3抑制率为69．49％，液质鉴定得到两个五肽，分别为HDHSE(IC50值=38．741lamolFL)和GENSQ(ICso值=65．377IJmol／L)。本研究收集文献报道的63个ACE抑制五肽，用偏最小二乘回归法建立起构效关系(QSAR)模型，用留一法进行内部验证，小

3、黄鱼ACE抑制肽进行外部验证，并筛选出一种未报到的新型ACE抑制肽。结果如下：模型的交叉验证相关系数Rev2为0．5752，且小黄鱼ACE抑制肽活性的预测值和实验值相差不大，有此可知，建立模型具有较强的预测能力。分析QSAR模型得出，ACE抑制五肽C．端起第一位氨基酸的电性参数和第二位氨基酸残基疏水性指数对ACE抑制活性的影响起主要作用(正相关)。此外，运用模型预测出一种未见报道的新型ACE抑制肽——IWHDC，人工合成后测得其ICso值为19．179lunol／L。以QSAR模型筛选出的新型ACE抑制肽——IWHDC为原料，研究其对人脐静脉内皮细胞的影响，测定了不同浓度肽对细胞增殖的

4、影响，以及细胞在氧化模型中(加入H202)对NO、MDA释放量和NOS、SOD活性的影响。结果表明，IWHDC可能通过抑制内皮细胞增殖，提高SOD，eNOS活性，增加NO的释放及降低MDA的释放来发挥降压功效，说明了IWHDC不仅能发挥ACE抑制作用，同时能促进体内的抗氧化，协同进一步促进血管舒张作用。关键词：小黄鱼；分离纯化；构效关系；IWHDC；降压机理U扬州大学硕士学位论文AbstractInthispaper,smallyellowcroakerwasusedasbasicmaterialswhichhydrolyzedtopreparedACEinhibitorypeptid

5、es．Thentheproductwasintroducedtopurifiedandidentified．Meanwhile，wemadeaQSARreaserchofACEinhibitorypentapeptidesandscreenedanovelACEinhibitorypeptide，alsouseditinantihypertensivemechanismresearchatthecelllevelwiththehopethatwecanprovideatheoreticalbasisontheresearchanddevelopmentofACEinhibitorype

6、ptides．Theeffectofprocessconditionsontheangiotensin·Iconvertingenzyme(ACE)inhibitoryofsmallyellowcroakerhydrolysedwithtrypsinwereinvestigatedusingresponsesurfacemethodology(RSM)．RP-HPLCmethodwasalsointroducedtomeasureACEinhibitoryactivityofhydrolysate．Resultsshowedthattheoptimalhydrolysisconditi

7、onswereasfollows：pH7．0，50℃ofhydrolysistemperature，16．5hofhydrolysistime，substrateataconcentrationlevelof5．6％andenzyme／substrateratioof9960．Theinhibitoryactivityofpeptidesobtainedundertheoptimalconditionswasupto87．36％．Thecrud