探析蛋黄ace抑制肽分离纯化研究

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1、广西大学硕士学位论文蛋黄ACE抑制肽分离纯化研究姓名：万顺刚申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：廖丹葵20070419蛋黄ACE抑制肽分离纯化研究摘要蛋黄ACE抑制肽是蛋黄蛋白质经碱性蛋白酶水解所得的短肽混合物，具有明显的体外降压作用。本实验的研究旨在经系列的分离纯化程序，得到具有活性的降压肽，为充分利用丰富的蛋黄蛋白质，提高鸡蛋利用价值和促进农业资源有效利用提供参考。酶解液脱色实验研究结果表明，加入1．5％活性炭、温度40"C、pH4．0的条件下脱色40min，脱色率达到83％，肽损失率5．6％。用截留分子量为10kDa和3．5k

2、Da超滤膜初步分离脱色酶解液，一级、二级超滤溶液温度分别为40℃和30℃、水解液浓度6％和操作压力O．3MPa时2种超滤膜具有较好的通量，可分别达到19L·m-2．h-1和1．3L·n1．2·h一；分别检测不同分子量段溶液ACE活性抑制率，结果显示ACE抑制肽主要集中在分子量小于3．5kDa溶液中，ACE活性抑制率达到51．3％。分子量小于3．5kDa的超滤液用离子交换和凝胶层析分离。当乙酸钠缓冲液pH4．1，洗脱液离子强度为lmol·L．1NaCI、进样量(肽的质量／树脂湿体积)为10mg·mL"1，洗脱温度35"C、流速控制在0．5m

3、L·min4时D61树脂具有较好分离效果，洗脱峰对ACE抑制活性提高到62．7％，肽的总回收率为82．4％。离子洗脱峰经SephadexG一15凝胶层析分离。当缓冲液乙酸铵浓度为O．1tool·L一、洗脱液流出速度O．5mL·rain"1、进样浓度40nag·mL"1的条件下，肽的总回收率有90*／,，洗脱组分54峰具有最强的ACE抑制活性。洗脱组分54峰经RP—HPLC反相制备色谱分离，可以得到12种组分，经活性检测，ACE抑制活性最强组分位于5#-a-a2，I--IPLC纯度达96％。放大实验表明，酶解工艺肽回收率8l％；超滤放大肽回

4、收率达76．8％；凝胶层析分离肽回收率达到68．8％。抗油脂氧化实验表明，油脂浓度为2．5％，ACEI浓度为0．02％时，ACE抑制肽与对照组具有相近的抗油脂氧化性。关键词：蛋黄蛋白质ACE抑制肽分离纯化ⅡTHESTUDYOFISOLAnONANDPI7RⅡICATIONANGIO．IENSINCON、，ERT扑TGENZYM匣嘲BITORPEPT：观FROMHYDROIjYSISCHⅡ【ENEGGYOLKPROTEINABSTRACTEggyolkantihypertensinpeptidewaspreparedbyhydrolyzin

5、gchikeneggyolkproteinwithalkaliproteasewhichhasobviouslyantihypertensinfunctioninvitro．Aseriesofisolatedproceduresareusedtogetactivepepetidesinthepurifyingprocess．Theresearchcangivereferrencetomakethemostoftheeggprotein，raisingtheeggusingvalue，accelarateingagriculturereso

6、urceefficiencyused．Studingthediscolorationofhydrolysissolutionandfindingoutwhen1．5％activatedcarbonwasputtohydrolysissolutionat40。CwithpH4．0anddecolou-rate40minnutes．Thediscolorationratiocanget83％andpepetidelossratiois5．6％．Themolecularweight3．5kDaand10kDaultraficationmembr

7、aneswasus-edtofilterthediscolorationhydrolysissolution,theresultshowedthattheope-ratingpressureiskeptat0．3MPa,thetemperatureiskeptat40"0and30"Candatthe6％hydrolysateconcentrationofprotein．TheJvofthetwokindsofmemb-ranecanachieve19L．m-2．h．1andl．3L·In-2·h_1．Bymeasuringthediff

8、erentmole．cularweightpeptideinhibitorytotheACEactive，itwasshowedthatthestron-Ⅲgestinhibitoryacti