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1、http://www.paper.edu.cn第32卷第1期东 北 农 业 大 学 学 报32(1):95～992001年3月JournalofNortheastAgriculturalUniversityMarch2001文章编号 1005-9369(2001)01-0095-05猪品种随机扩增多态DNA指纹分析123白丽萍,李景鹏,陈瑶生(1.辽宁省公安厅刑科所 辽宁 沈阳;2.东北农大生命科学学院 哈尔滨;3.华南农业大学动物科学系 广州)摘要 从20个10碱基随机引物中筛选出12个引物对长白猪、哈白猪、大白猪、民猪、香猪、香哈杂交猪及长哈杂交猪共41个个体的核DNA遗传差异进行了RA
2、PD分析,共获得了97个RAPD标记。品种内遗传相似度总体看来呈引入猪种→培育猪种→地方猪种递减的趋势,品种间遗传距离和聚类分析的结果是:香哈杂交猪与香猪聚为一类,长哈杂交猪与长白、哈白、大白聚为一类,民猪单独聚为一类。本实验得出的结果与品种的形成历史及采样的实际情况是相吻合的。关 键 词:RAPD;遗传变异;遗传距离;猪种中图分类号:S828,S821.2 文献标识码A猪(4头)哈白猪(5头)及香哈杂交猪0 前 言(2头)的血样采自东北农业大学动物科学系实验站,民猪(9头)的血样采自兰西种猪场, 随机扩增多态DNA(RAPD)以简便、快大白猪(9头)的血样采自齐齐哈尔畜牧研究速和多态
3、性检出率高的特点,在动植物的遗所。〔1～5〕传研究中发挥了重要作用。通过查阅大112 基因组DNA提取量文献表明,RAPD用于猪种遗传变异研究用常规的酚ö氯仿方法提取血液中的基〔6〕因组DNA。尚不多见,本研究试使用20个10寡核苷酸随机引物对我国两个地方品种(民猪、香113 随机引物猪),一个培育品种(哈白猪),两个引入品实验共使用20种10bp随机引物种(长白猪、大白猪)及两个杂交组合猪(OPG01-OPG20,美国Operon公司产品),(香哈杂交猪、长哈杂交猪)的核DNA遗传购自中科院遗传所。差异进行分析比较,为家猪品种内和品种间114PCR反应和电泳遗传变异的研究提供DNA分子水平
4、上的实DNA扩增仪采用PE-9600型扩增仪,验依据。PCR反应体积为25LL,其中含有10mmol·-1-1L的Tris-HCL,PH8130;50mmol·L-1-11 材料和方法KCL;2100mmol·LMgCl;20nmol·L-1dNTPs;0120Lmol·L引物;明胶01001%;50ng模板DNA;1150UTaq酶。反111 实验材料应混合物加入Taq酶前,97℃预变性7min,长白猪(9头)、长哈杂交猪(3头)、香冷却后加入Taq酶,反应程序是:94℃变性 收稿日期:2000-06-011min,36℃退火1min,72℃延伸2min,45℃转载中国科技论文在线htt
5、p://www.paper.edu.cn·96·东 北 农 业 大 学 学 报第32卷个循环后,72℃再延伸7min,每次反应均设似度,根据遗传距离采用非加权组平均法不含模板DNA的空白对照。扩增产物在含(UnweightedGroupArighmeticMean,UP2有溴化乙锭的1140%琼脂糖凝胶中电泳分GMA)进行聚类分析,构建亲缘关系树状图。离,电泳结果在紫外透射仪上观察拍照。115 数据分析2 结 果任意两个个体间的遗传差异用遗传距离(GeneticDistance,D)和遗传相似度(Genet2211 随机引物筛选及DNA扩增结果icSimilarity,S)衡量:在20种随机
6、引物中,以多态性较高和重Sxy=2NxyöNx+NyDxy=1-Sxy复性较好为原则筛选出12个引物,这12个其中,Nxy是x.y两个体共享的RAPD条随机引物共检测出97条扩增片段,其中有带数,Nx.Ny分别为x和y个体拥有RAPD66个为多态片段,其余31个片段是各个品条带数。品种内遗传相似度取群体内所有可种内及品种间稳定存在的公共带,这些公共能个体间Sxy的平均数,各品种间的遗传相带反映了家猪核DNA进化上的保守性。各似度(Sij)取i和j品种间所有随机组合个体品种间及同一品种不同个体间,可检测到不间遗传相似度的平均值。根据RAPD指纹图同带型(图1),所选用引物序列及扩增情况谱,计算
7、出各品种内和品种间的平均遗传相见表1。图 1 用引物OPG09扩增的RAPD图谱Fig11TheatlasofRAPDtheprimerofOPG09112为香哈杂交猪xiang×harbinwhite12113114为长哈杂交猪Landrace×Harbinwhite31415为香猪 xiangpig15116117为民猪 Minpig61718为长白猪 Landrace18119120为大白猪 Large
