近紫外线对兔晶状体上皮细胞缝隙连接通讯功能的影响及其发生机制

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1、重庆医科大学硕士学位论文近紫外线对兔晶状体上皮细胞缝隙连接通讯功能的影响及其发生机制姓名：彭艳丽申请学位级别：硕士专业：眼科学（白内障）指导教师：李立20060501重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均巳在论文中作了明确的说明并表示

2、谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．学位论文作者签名：日期：主!!§：至：!学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，印：研究生在攻读学a位期问论文工作的知识产权单位属重庆医科大学．本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文．论文作者签名：指导教师签名

3、：重庆医科大学硕士研究生学位论文缩写词UVARLECsG儿CGJCxFRAPLSCMDTTCFDAEDTAFITCDMEMHEPBSPVDFDMSOkDa英文UltravioletA符号说明中文翻译近紫外线RabbitLensepithelialcells兔晶状体上皮细胞Gapjunctionintercellularcommunication缝隙连接细胞通讯Gapjunction缝隙连接Connexin连接蛋白Fluorescenceredistributionafter荧光光漂白后恢复photo

4、bleaching技术Laserscanningconfocalmicroscope激光扫描共聚焦显微镜Dithiothreitol二巯基苏糖醇Carboxvfluoresceindiacetate碳氧荧光素醋酸盐Ethylenediamineteraaceticacid乙二铵四乙酸Fluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素DulbeccosModifiedEaglesMediumDMEM培养液Hematoxylin．Eosin苏木精．伊红PhosphateBufferedSa

5、line磷酸盐缓冲液Polyvinylidenefuoride聚偏乙烯氟化物Diamethvsulfoxide二甲基亚砜kilodalton千道尔顿重庆医科大学硕士研究生学位论文近紫外线对兔晶状体上皮细胞缝隙连接通讯功能的影响及其发生机制摘要目的缝隙连接细胞通讯与白内障发生的关系是白内障研究领域的一个新的热点，兴起于近几年，研究处起始阶段。晶状体是一个无直接血供的透明组织，需通过特殊的机制进行物质代谢以维持透明性。晶体上皮细胞在保持晶体透明性方面起着重要的作用”I。晶体上皮细胞之间以及晶体上皮细胞与

6、晶体纤维细胞之间是通过缝隙连接进行营养物质的运输，代谢产物的排泄和晶体各种成分之间渗透性平衡调节的‘21。流行病学证据表明，长期慢性的紫外线辐射被认为是老年性白内障形成的主要原因，而近紫外线辐射对晶状体上皮细胞GJIC的影响及由此导致的白内障的发生机理，在国内外尚未见相关研究报道。本实验的目的旨在探讨近紫外线照射对兔眼晶体上皮细胞缝隙连接通讯功能的影响情况及其发生机理，其深入的研究将为紫外线辐射引起的老年性白内障的发病机制提出一个新的理论依据，为以后白内障的药物防治开创了～条全新的思路。方法1．取兔

7、晶状体前囊膜行组织细胞培养，传代的2—3代RLECs在12孔板中培养24小时，同一近紫外线光源下一固定位置(50cm)，测得2重庆医科大学硕：E研究生学位论文该点的功率为0．2mW／cm2，按照不同的照射时间分别为5、10、15、20、25、30分钟，对RLECs进行照射。采用相差显微镜观察照射后细胞形态学的改变，台盼蓝拒染法计算细胞的损伤率。2．采用荧光光漂白恢复技术，通过激光共聚焦显微镜检测经近紫外线照射后RLECs的缝隙连接通讯功能变化情况。3．应用Western—blot方法，从翻译水平检测

8、近紫外线对RLECs的Cx43蛋白表达变化的影响；采用间接免疫荧光染色法，对RLECs的Cx43蛋白进行定位分析。结果1．倒置相差显微镜观察发现：经近紫外线照射5分钟、10分钟的RLECs其形态与正常对照组相比无明显改变，随着照射时间的延长，细胞形态出现一系列改变：胞浆可见点状颗粒和空泡、细胞核密度增高等，当照射30分钟时细胞则出现胞质浓缩，颜色加深，核固缩等改变。2．台盼蓝拒染法观察发现：同一照射强度，随着照射时间的延长，损伤率逐渐增加，5分组、10分钟组、15分钟