幽门螺杆菌侵入胃粘膜上皮细胞对细胞功能的影响及其机制

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1、分类号：R373学校代码：10392学科专业代码：100103学号：2100102447福建医科大学硕士研究生毕业论文幽门螺杆菌侵入胃粘膜上皮细胞对细胞功能的影响及其机制ThemechanismandtheeffectthatinducedbytheintracellularHelicobacterpyloriongastricepithelialcell所在院（系）：基础医学院研究生：林允斌学科（专业）：病原生物学导师：佘菲菲教授研究起止日期：2012年7月至2013年3月二O一三年三月2目录英文缩略语…………………………………

2、……………4中文摘要…………………………………………………5英文摘要…………………………………………………7前言…………………………………………………9材料与方法………………………………………………11结果………………………………………………………24讨论………………………………………………………36结论………………………………………………………39参考文献………………………………………………….40综述……………………………………………………….42致谢……………………………………………………….463英文缩略语表缩略语英文全名

3、中文译名CFUColony-FormingUnits菌落形成单位BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜FBSfetalbovineserum胎牛血清GMGentamicin庆大霉素HpHelicobacterpylori幽门螺杆菌MOImultiplicityofinfection感染复数PBSphosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲液real-timereverse-transcriptionpolymerase实时定量反转录聚合酶RT-PCR

4、chainreaction链式反应活化诱导胞嘧啶核苷脱AIDactivation-inducedcytidinedeaminase氨酶ELISAenzymelinkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附测定mRNAmessengerRNA信使RNAcDNAcomplementarydeoxyribonucleicacid互补脱氧核糖核酸MALTmucosa-associatedlymphoidtissue粘膜相关淋巴组织ssecond秒minminute分钟hhour小时ODopticaldensity光密度g（RC

5、F）relativecentrifugalforce相对离心力rpmrevolutionperminute或r/min每分钟的转数ddH2OdoubledistilledH2O双蒸水AmpAmpicillin氨苄青霉素NationalCenterforBiotechnologyNCBI美国生物技术信息中心InforfmationBLASTBasiclocalalignmentsearchtool同源序列比对工具EpEppendorftube离心管MHMueller-Hinton水解酪蛋白4幽门螺杆菌侵入胃粘膜上皮细胞对细胞功能的影

6、响及其机制中文摘要目的：长期以来幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,Hp)被认为是一种胞外菌，近年有研究发现，Hp可侵入胃上皮细胞，并可在细胞内繁殖存活，本课题旨在通过研究侵入胞内的Hp对胃上皮细胞功能的影响，探讨Hp侵入胞内的致病作用及其机制。方法：从本实验室保存的Hp菌株中选择2株高侵袭力菌株（标准株NCTC11637及临床株T494）和2株低侵袭力菌株（标准株SS1及临床株T049），分别感染人胃腺癌上皮细胞（AGS细胞）(MOI=100)，以抗β1整合素抗体预处理阻止侵袭为对照组，经庆大霉素保护性侵袭实验，采

7、用以下方法检测侵入胞内Hp对细胞功能的影响：①CCK8法检测细胞的增殖；②流式细胞仪检测细胞凋亡；③ELISA检测白细胞介素因子8（interleukin-8，IL-8）的表达；④细胞免疫荧光检测活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶（activation-inducedcytidinedeaminase,AID）蛋白的表达；⑤实时定量反转录聚合酶链式反应（RealTime-PCR）分析AID的转录水平；⑥萤火虫荧光素酶评价核转录因子NF-κB活性。用SN-50预处理AGS细胞以抑制NF-κB活性，重复上述①-⑤的检测实验。结果：1、侵入胞内的

8、Hp⑴促进AGS细胞的增殖，高侵株NCTC11637、T494作用的细胞增殖率（37.72%和36.51%）均高于低侵株SS1、T049（26.97%和26.17%），抗β1整合素抗体处理后各组AGS细胞的增殖率均降低（p<0.05）；⑵不影响AG