幽门螺杆菌感染对胃黏膜上皮细胞端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系

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1、幽门螺杆菌感染对胃黏膜上皮细胞端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系作者：王国安刘海峰房殿春陈刚何俊堂腾小春　【摘要】目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染对端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系。方法慢性胃炎伴萎缩者16例，伴肠化生者15例，伴中、重度不典型增生者14例，胃癌19例共64例为研究对象。采用快速尿素酶试验、inaldeoxynucleotidyltransferasemediateddeoxyuridinetriphosphatebiotinnickendlabeling(TUNEL)techniqueandimmunohistochemistryantelomeras

2、ecatalyticsubunit(hTERT)in64specimensincluding16chronicatrophicgastritis,15intestinalmetaplasia,14gastricdysplasiaand19humangastriccarcinoma.Results(1)ThepositiverateofhTERTprotEinexpressioninchronicatrophicgastritis,intestinalmetaplasia,gastricdysplasiaandhumangastriccarcinomaerasemaytakep

3、artinalloftheprocessofgastriccarcinogenesis.(2)H.pyloriinfectioncannotonlyactivatetelomerasebutalsoincreasetheapoptosisofgastricepithelioidcells,a;H.pylori;Telomerase;Cellapoptosis端粒酶的激活在肿瘤发生中起关键作用［1］。端粒酶活化与细胞凋亡的关系是目前肿瘤研究的热点之一。探讨Hp感染对胃黏膜上皮细胞端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系，是研究Hp致癌机制的一个重要方向。本研究旨在对胃癌演变过程中H

4、p感染，端粒酶激活及细胞凋亡之间的关系进行初步探讨。　1材料与方法1.1材料随机抽取我院2000-2002年胃镜活检标本和胃癌手术切除标本64例。其中慢性胃炎伴萎缩者16例，伴肠化生者15例，伴中、重度不典型增生者14例，胃癌19例均为胃远端癌。胃癌患者在手术前均未接受化疗、放疗或免疫治疗。胃镜活检标本均取自胃窦部，组织标本经福尔马林固定，石蜡包埋，4μｍ厚连续切片，并经苏木精伊红染色病理诊断证实。兔抗人hTERT多克隆抗体、SP免疫染色试剂盒均购自SantaCruz公司。1.2方法1.2.1Hp检测采用快速尿素酶法和antelomerasecatalyticsubuni

5、t,hTERT)蛋白检测采用链霉菌素生物素过氧化物酶(SP)染色法。染色程序按SP法操作常规进行，第一抗体原液按1∶100稀释。以已知hTERT蛋白阳性的胃癌为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。光镜下观察免疫组化染色切片的显色反应,计数500个细胞中的阳性细胞数,hTERT蛋白表达阳性细胞数<10％判为阴性(-)，10％～25％判为弱阳性(+),26％～50％判为中等阳性(),≥51％判为强阳性()。1.2.3凋亡细胞的原位检测采用TUNEL技术原位检测凋亡细胞。细胞凋亡原位检测试剂盒为德国Roche公司产品。染色步骤如下：(1)切片经二甲苯脱蜡，梯度乙

6、醇水化；(2)3%过氧化氢封闭15min；(3)蒸馏水冲洗，PBS振洗3次，每次5min；(4)0.5%胰蛋白酶消化20min；(5)PBS振洗3次，每次5min；(6)滴加TUNEL反应液，37℃孵育60min；(7)PBS振洗3次，每次5min；(8)滴加过氧化物酶连接的抗荧光素抗体，37℃孵育30min；(9)PBS振洗3次，每次5min；(10)DAB显色3～5min；(11)自来水充分冲洗，苏木精复染1min；(12)自来水充分冲洗，过蒸馏水，梯度酒精常规脱水、二甲苯透明；(13)中性树胶封片。以已知TUNEL阳性胃癌切片作为阳性对照，以PBS代替TUNEL反应液作

7、为阴性对照。阳性对照切片经DNaseⅠ预处理10min，再接TUNEL染色步骤。光镜下观察TUNEL染色切片的显色反应，选择5个以上有代表性的视野，计数500个细胞中的阳性细胞数，即凋亡细胞指数，用百分数表示。1.3统计学处理数据以±s表示，χ2检验，采用SPSS10.0统计程序包进行分析，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1hTERT蛋白在不同胃黏膜病变中的表达状况hTERT蛋白阳性反应物质呈棕黄色颗粒,主要位于细胞质内，偶可伴细胞核着色(图1)。萎缩性胃炎、肠化生、不典型增生和胃癌组织