幽门螺杆菌感染对胃黏膜上皮细胞端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系

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1、幽门螺杆菌感染对胃黏膜上皮细胞端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系作者：王国安刘海峰房殿春陈刚何俊堂腾小春　【摘要】目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染对端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系。方法慢性胃炎伴萎缩者16例，伴肠化生者15例，伴中、重度不典型增生者14例，胃癌19例共64例为研究对象。采用快速尿素酶试验、WarthinStarry银染色检测幽门螺杆菌，采用SP法检测人端粒酶催化亚单位(hTERT)蛋白表达，采用TUNEL染色法原位检测细胞凋亡。结果(1)萎缩性胃炎、肠化生、不典型增生和胃癌组织中hTERT蛋白表达率分别为%、%、%和%，呈递增趋势。Hp阳性患者

2、hTERT蛋白表达率为%，显著高于Hp阴性患者(%，P【关键词】胃癌幽门螺杆菌端粒酶细胞凋亡【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofinfectiononhTERTexpressionanditsrelationshipwithcellularapoptosis.MethodswasdetectedbyureasetestandWarthinStarrymethod.Terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddeoxyuridinetriphosphatebiotinni

3、ckendlabeling(TUNEL)techniqueandimmunohistochemistrywereusedtodetecttheapoptoticcellsandtheexpressionofhumantelomerasecatalyticsubunit(hTERT)inspecimensincluding1chronicatrophicgastritis,1intestinalmetaplasia,1gastricdysplasiaand1humangastriccarcinoma.Results(1)ThepositiverateofhTERTprot

4、Einexpressioninchronicatrophicgastritis,intestinalmetaplasia,gastricdysplasiaandhumangastriccarcinoma%,%,%%,whichtookonaincreasingtendency.ThepositiverateofhTERTinthecaseswithinfectionwassignificantlyhigherthanthatinthecaseswithoutinfection(%%,P【Keywords】Gastriccarcinoma;;Telomerase;Cell

5、apoptosis端粒酶的激活在肿瘤发生中起关键作用［1］。端粒酶活化与细胞凋亡的关系是目前肿瘤研究的热点之一。探讨Hp感染对胃黏膜上皮细胞端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系，是研究Hp致癌机制的一个重要方向。本研究旨在对胃癌演变过程中Hp感染，端粒酶激活及细胞凋亡之间的关系进行初步探讨。　1材料与方法材料随机抽取我院XX-XX年胃镜活检标本和胃癌手术切除标本64例。其中慢性胃炎伴萎缩者16例，伴肠化生者15例，伴中、重度不典型增生者14例，胃癌19例均为胃远端癌。胃癌患者在手术前均未接受化疗、放疗或免疫治疗。胃镜活检标本均取自胃窦部，组织标本经福尔马林固定，石蜡包埋

6、，μｍ厚连续切片，并经苏木精伊红染色病理诊断证实。兔抗人hTERT多克隆抗体、SP免疫染色试剂盒均购自SantaCruz公司。方法Hp检测采用快速尿素酶法和WarthinStarry银染色法，两种方法均阳性者判为Hp感染，两种方法均阴性者判为Hp阴性，单项阳性者退出试验。人端粒酶催化亚单位(humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)蛋白检测采用链霉菌素生物素过氧化物酶(SP)染色法。染色程序按SP法操作常规进行，第一抗体原液按1∶100稀释。以已知hTERT蛋白阳性的胃癌为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。光镜下观察免

7、疫组化染色切片的显色反应,计数500个细胞中的阳性细胞数,hTERT蛋白表达阳性细胞数凋亡细胞的原位检测采用TUNEL技术原位检测凋亡细胞。细胞凋亡原位检测试剂盒为德国Roche公司产品。染色步骤如下：(1)切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；(2)3%过氧化氢封闭1min；(3)蒸馏水冲洗，PBS振洗3次，每次min；(4)%胰蛋白酶消化20min；(5)PBS振洗3次，每次min；(6)滴加TUNEL反应液，3℃孵育60min；(7)PBS振洗3次，每次min；(8)滴加过氧化物酶连接的抗荧光素抗体，3℃孵育30min；(9)PBS振洗3