幽门螺杆菌对胃粘膜上皮细胞侵袭作用及其意义

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1、福建医科大学2009级硕士学位论文2万方数据福建医科大学2009级硕士学位论文目录英文缩略语………………………………………………4中文摘要…………………………………………………5英文摘要…………………………………………………10前言…………………………………………………13材料与方法………………………………………………14结果………………………………………………………24讨论………………………………………………………35结论………………………………………………………38参考文献………………………………………………….39致谢

2、……………………………………………………….41综述……………………………………………………….423万方数据福建医科大学2009级硕士学位论文英文缩略语缩略语英文全称中文全称Acracrylamide丙烯酰胺BisN,N’-methylene-bis-acrylamideN-N’-甲叉双丙烯酰胺BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白CFUColony-FormingUnits菌落形成单位DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜FBSfetalbovineserum胎牛血清GMGentamicin

3、庆大霉素HpHelicobacterpylori幽门螺旋杆菌IPTGisopropylthio--D-galactoside异丙基硫代--D-半乳糖苷MOImultiplicityofinfection感染密度PAGEpolyacylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSphosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲液PCRpolymerasechainreation聚合酶链式反应SDSsodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠TBStris-bufferedsal

4、ineTris盐缓冲液TrisTris-[hydroxymethyl]aminomethane三（羟甲基）胺基甲烷4万方数据福建医科大学2009级硕士学位论文中文摘要幽门螺杆菌对胃粘膜上皮细胞的侵袭作用及其意义目的幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,Hp)是一种可长期定植于胃粘膜的革兰阴性微需氧菌。Hp不仅是引起萎缩性胃炎和胃溃疡等慢性炎症的致病因子，而且与胃癌和胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤等恶性疾病的发生密切相关。近年来，大量的研究表明Hp可以侵入胃粘膜上皮细胞，但Hp侵袭胃上皮细胞的机制未知，与疾病的相关性也

5、未知。本课题研究不同消化系统疾病来源的Hp对AGS细胞的侵袭作用及Hp侵袭AGS细胞对细胞功能的影响，探讨Hp的侵袭力与致病的相关性，旨在进一步明确Hp的致病机理。方法1、幽门螺杆菌对AGS细胞的侵袭作用1.1幽门螺杆菌对AGS细胞的侵袭率：采用庆大霉素保护侵袭实验，用Hp++标准株NCTC11637（cagPAI、VacA）、SS1（无cagPAI功能）和75株临床分离株（来源于胃炎30株、胃溃疡25株、胃癌20株）感染AGS细胞（MOI=50:1）,2h后用含庆大霉素的细胞培养液（庆大霉素浓度为100µg/ml）洗涤并用

6、含庆大霉素的培养液（庆大霉素浓度为25µg/ml）维持培养。分别在感染4h和12h后裂解细胞，将裂解液梯度稀释后涂布于布氏血琼脂平板，培养6d后进行菌落计数。通过计数Hp感染细胞4h后细菌量作为侵入细胞的细菌数，Hp的侵袭率=侵入细胞的细菌数/感染细胞的细菌数×100%；感染12h后的细菌量作为Hp在细胞内的繁殖量。1.2幽门螺杆菌作用AGS细胞的侵袭粘附比：以上述同样的菌株感染AGS细胞（MOI=50:1）,感染2h后洗涤并裂解细胞，将裂解液梯度稀释后涂布于布氏血琼脂平板，培养6d后进行菌落计数，此数据为粘附的细菌数；感染

7、2h后用含庆大霉素的细胞培养液（庆大霉素浓度为100µg/ml）洗涤，并用含庆大霉素的培养液（庆大霉素浓度为100µg/ml）继续维持培养2h，洗涤并裂解细胞，同样的方法进行菌落计数，此数据为侵入的细菌数；计算Hp的侵袭粘附比，侵袭粘附比=侵入的细菌数/粘附的细菌数。5万方数据福建医科大学2009级硕士学位论文1.3检测幽门螺杆菌在细胞内的存活时间：HpSS1感染AGS细胞（MOI=10:1），庆大霉素（25µg/ml）维持培养，分别在感染后24h、36h、48h、72h、4d、5d裂解细胞，将裂解液梯度稀释后涂布于布氏血琼

8、脂平板，培养6d后进行菌落计数。1.4观察幽门螺杆菌对AGS细胞的侵袭过程：HpNCTC11637感染AGS细胞（MOI=100:1）2.5h、4h、6h、12h、24h，PBS洗涤后收集细胞，经固定、脱水、包埋，制成超薄切片，透射电镜下观察Hp侵袭的情况。NCTC11637感染AGS细胞