mtt比色法检测苦杏仁甙对兔晶状体上皮细胞增生的影响

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1、MTT比色法检测苦杏仁甙对兔晶状体上皮细胞增生的影响【摘要】目的研究苦杏仁甙(Amygdalin)对体外培养的兔晶状体上皮细胞增生的影响。方法取第2代对数生长期的兔晶状体上皮细胞，培养24h后，加入不同浓度的苦杏仁甙(4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125mg/L)作用24h后，采用MTT法观察苦杏仁甙对兔晶状体上皮细胞增生的影响。结果苦杏仁甙随着浓度的增加，兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用逐渐增强。结论苦杏仁甙能有效抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞增生，其抑制作用在一定浓度范围内有剂量依赖性。【关键词】苦杏仁甙;兔晶状体上皮细胞;后囊浑浊;MTT比色法　　[Abstract

2、]ObjectiveTostudytheeffectsofAmygdalinontheproliferationofrabbitlensepithelialcells(RLECs)invitro.MethodsRLECswereprimarycultured.AfterthesecondgenerationofRLECswereincubatedfor24hours，weaddeddifferentconcentraionsofAmygdalinfor24hours.ThecellproliferationofRLECswasdeterminedbyMTTassay.ResultsTh

3、einhibitoryratesofRLECsproliferationwereincreasedindose.dependentwaysbyAmygdalininvitro.ConclusionAmygdalincouldeffectivelyinhibittheproliferationofRLECs，anditmighthavebroadprospectsinthepreventionofposterior6capsularopacification.　　[Keywords]amygdalin;rabbitlensepithelialcells;posteriorapsularo

4、pacification;MTTassay　　后囊浑浊(posteriorcapsularopacification，PCO)是现代白内障囊外摘出人工晶状体植入术后最常见的并发症。后囊混浊的发生主要由于术后残留的晶状体上皮细胞(lensepithelial　cells，LECs)发生增生及后囊的纤维化有关。其发生率往往与年龄相关，年龄越轻，发生率越高。在成人，术后发生率为30%～50%，在儿童则为100%。因此，如何有效地抑制晶状体上皮细胞增生对于PCO的防治具有重要意义。苦杏仁甙(Amygdalin)是中药桃仁的主要成分，是一种能生氰(cyanogensic)的化合物。存在于水果果核

5、和坚果中。有研究表明它能有效抑制纤维母细胞增生[1]，而且可以明显地抑制组织的纤维化[2]。这里我们采用MTT比色法研究其对体外培养的兔晶状体上皮细胞(rabbitlensepithelialcells，RLECs)增生的影响，为进一步探索其作用机制提供理论依据。　　1资料与方法　　1.1试剂与仪器6主要试剂苦参碱购自西安天丰生物科技有限公司;胰蛋白酶、小牛血清、DMEM干粉培养基、噻唑蓝、二甲基亚砜。二氧化碳培养箱、倒置相差显微镜、超净工作台、自动酶标读数仪(E2500型，美国BioRad)。　　1.2细胞培养方法健康雄性新西兰大白兔5只，体重1.4～1.6kg，以空气栓塞法处死。立

6、即取出眼球置于1∶8000的庆大霉素生理盐水中，无菌手术台上将其晶状体取出。在手术显微镜下，剥离晶状体囊膜，剪为大小约1mm2的小块，均匀平贴于培养皿中，间隔3～5mm。放置2～3h待囊贴牢后后，加入含20%小牛血清的DMEM培养基至刚好浸没囊膜，置入二氧化碳培养箱培养。3～5天换液1次，待细胞长满后，用0.25%胰蛋白酶消化。按1∶2的比例接种到培养瓶中。倒置显微镜下动态观察细胞生长情况，取第2代细胞进行实验。　　1.3细胞处理取第2代RLECs，用胰酶消化并调整细胞浓度为5×104个/ml，接种于96孔培养板，每孔200μl。置入二氧化碳培养箱，培养24h静待细胞贴壁;加入1g/L

7、苦杏仁甙PBS溶液并调整浓度为4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125mg/L，空白对照组则加入等量的PBS溶液，培养24h后，每孔加入MTT(5mg/L)溶液20μl，继续培养4h后中止培养，吸去孔内培养上清液，加入150μl二甲基亚砜溶液，室温下微量振荡器振荡10min，自动酶标仪比色(波长570nm)，测定吸光值。以此计算细胞存活率和细胞抑制率(细胞存活率%=药物组平均吸光度值/正常对照组平均吸光度值×100%，细胞抑制率%=