星状孢菌素在紫的外线辐射时对兔晶状体上皮细胞通讯功能的保护作用及其机制精选

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1、重庆医科大学硕士学位论文星状孢菌素在近紫外线辐射时对兔晶状体上皮细胞通讯功能的保护作用及其机制姓名：王真艳申请学位级别：硕士专业：眼科学（白内障）指导教师：李立20080501重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写英文全称符号说明ＳＴＳｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅＵＶＡＲＬＥＣＧＪｌＣＧＪＣｘＰＫＣＵｌｔｒａｖｉｏｌｅｔＡＲａｂｂｉｔＬｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＧａｐｊｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｔ’＿、ｉａｐｊ’ｕｎｃｔｉ。ｏｎＣｏｎｎｅｘｉｎＰｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣＬａｓ

2、ｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌＬＳＣＭ．ｍｌｃｒｏｓｃｏｐｅＦＲＡＰＣＦＤＡＥＤＴＡＦＩＴＣＦｈｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｆｔｅｒｐｈｏｔｏｂｌｅａｃｈｉｎｇＣａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｄｉａｃｅｔａｔｅＥｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅＤｕｌｂｅｃｃｏｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅｓＤＭＥＭＭｅｄｉｕｍＰＢＳＰＶＤＦＤＭＳＯＰｈｏｓｐｈａｔｅＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅＰｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅｆｌｕｏｒｉｄｅ

3、Ｄｉａｍｅｔｈｙｓｕｌｆｏｘｉｄｅ中文全称星状孢菌素近紫外线兔晶状体上皮细胞缝隙连接细胞通讯缝隙连接连接蛋白蛋白激酶Ｃ激光扫描共聚焦显微镜荧光光漂白后恢复技术碳氧荧光素醋酸盐乙二铵四乙酸异硫氰酸荧光素ＤＭＥＭ培养液磷酸舱缓冲液聚偏乙烯氟化物二甲基亚砜重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作

4、的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者签名：墨重整．日期：ｚ缈ｇ．盘．多Ｄ学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外），可以采用影印、缩印或其

5、他手段保存论文．论文作者签名：墨垒垫指导教师签名：日重庆医科大学硕士研究生学位论文星状孢菌素在近紫外线辐射时对兔晶状体上皮细胞通讯功能的保护作用及其机制摘要目的近年来晶状体缝隙连接介到的胞问通讯（Ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，ＧＪＩＣ）异常已经作为白内障的重要病因而逐渐受到重视。缝隙连接是存在于相邻细胞间，由缝隙连接蛋［刍（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ，Ｃｘ）六聚体组成的细胞间连接，它是细胞间无机离子、水溶性小分子、代谢产物和电化学交流的直接通道。流行病学证据表明，长期慢性的紫外线，尤其是

6、波长为３２０ｎｍ一４０ｎｍ的长波紫外线，又称近紫外线，主要由晶状体吸收，因此近紫外线的辐射与年龄相关性白内障的发生可能有非常密切的关系，但机制尚未完全明确，有学者通过研究已经证实近紫外线、微波辐射１１１等相关理化因素可以导致晶状体发生混浊。本研究中，我们引入蛋白激酶Ｃ（ＰｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）抑制剂星状孢菌素（Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ，ＳＴ），旨在探讨近紫外线辐射损伤时，星状孢菌素是否对晶状体上皮细胞通讯功能有保护作用，以期进一步证实近紫外线辐射引发白内障，系通过激活ＰＫＣ途径引起ＧＪＩＣ功能下降所致，从而

7、深入探讨近紫外线辐射导致白内障发病的机制，为以后白内障的药物防治提供一条新的线索。方法２重庆医科大学硕士研究生学位论文１．兔晶状体上皮细胞的原代培养及设立实验分组：健康成年无眼疾家兔静脉空气栓塞处死后，取出眼球后消毒，截取前囊膜修剪成数片，ｌ型胶原酶消化后接种，１０．１２ｈ后第一次换液，后每２ｄ换液，７一１０ｄ晶体细胞可长满大部分瓶底，并行传代，取第２．３代细胞用于实验研究。预实验选取星状孢菌素的合适药物浓度，确定近紫外线光源的辐射能量，设立正常组，实验组和对照组。２．晶状体上皮细胞通讯功能的评定：应用激光共聚焦显微镜，通

8、过荧光光漂白恢复技术，分别检测正常组，实验组和对照组的晶状体上皮细胞的荧光恢复率，以评定细胞通讯功能状态。３．缝隙连接蛋白Ｃｘ４３表达的检测：应用Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ方法，从翻译水平检测各个组Ｃｘ４３蛋白表达情况。４．缝隙连接蛋白Ｃｘ４３定位的检测：采用细胞间接免疫荧光化学技术，对晶状体上皮细胞Ｃｘ