环孢霉素A对人晶状体上皮细胞抑制的体外研究

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1、分类号：R77密级：学位类别：科学学位团专业学位口硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION学校代码：1062学号：2010602573学科门类：医学又肄眚科矢等论文题目：环孢霉素A对人晶状体上皮细胞抑制的体外研究TITLECyclosporinAinhibithumanlensepithelialcellproliferationinculture一级学科：临床医学二级学科：眼科学论文作者：苗青指导教师：张红教授导师组成员：田芳博士东丽洁博士孙靖博士天津医科大学研究生院二O一三年五月学位论文原创

2、性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：益盔日躯，≥年r月雩。日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借

3、阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密囹。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：导师签名：荡舌日疽b一雌日凇哆年j月芗。日^、年f只专9Et天津医科大学硕士学位论文目的中文摘要体外研究环孢霉素A(CsA)对人晶状体上皮细胞(HLEB．3)抑制，计算CsA对人晶状体上皮细胞的半数有效抑制浓度；定量测定PCNA基因在无CsA处理的对照组与CsA处理的实验组中的表达，进一步探讨CsA抑制人晶状体上皮细胞增殖的分子作用机制，验证Cs

4、A与PCNA阳性细胞表达量的关系，为CsA修饰的IOL体内实验提供依据。方法体外培养来源于广州中山医科大学眼科中心的人晶状体上皮细胞株HLEB．3细胞。(1)细胞增殖实验的测定观察细胞增殖状态，实验设置10个细胞浓度梯度(0．125×104个／ml、0．25×1．04个／ml、0．5×104个／ml、1．0×104个／ml、1．5×104个／ml、2．0×104个／ml、2．5×104个／ml、3．0×104个／ml、3．5×104个／ml、4．0×104个／m1)。以2×104个／ml细胞密度种植96孔板

5、，设置实验组与对照组，实验组给予CsA刺激，浓度为lug／ml、2ug／ml、4ug／ml、8ug／ml、16ug／ml，作用时间24h、48h、72h，对照组无CsA刺激，作用时间24h、48h、72h。每组设2个平行复孔，重复3次。(2)PCNA基因的表达测定以1×105个／ml的细胞密度接种于24孔板，实验组给予CsA刺激，浓度lug／ml，作用24h、48h，对照组无CsA刺激，应用RT-PCR检测PCNA基因的复制；应用组织免疫学方法检测PCNA阳性细胞的表达。每组设2个平行复孔，重复3次。(3)

6、RT-PCR结果应用2-ZXZXCT统计量进行分析，免疫组织化学结果分别应用PI)及IPP．5．0图像分析法。所有统计学数据，应用SPSSl9．0进行统计学分析，检验水准a=0．05。结果(1)在低浓度时(1ug／m1)CsA作用24h对人晶状体上皮细胞的增殖抑制实验组与对照组差异不具有统计学意义(尸>0．05)，作用48h对细胞增殖抑制实验组与对照组差异具有统计学意义(尸<0．05)。CsA作用24h，IC50=71．010-M．851I．tg／ml，T天津医科大学硕士学位论文Probit--．2．964

7、+1．601x；CsA作用48h，IC50=25．529M．407}tg／ml，Probit=一1．363+1．969x；CsA作用72h，IC50=17．881+1．252Itg／ml，Probit=．5．915+4．723x。CsA对HLEB．3细胞的抑制呈时间依赖性及浓度依赖性。(2)RT-PCR测定，CsAlug／ml作用24hPCNA表达量实验组与对照组差异不具有统计学意义(胗0．05)，作用48hPCNA表达量实验组与对照组差异具有统计学意义(P<0．05)。(3)免疫组织化学测定，CsAlug

8、／ml作用24h、48hPCNA阳性细胞在实验组与对照组中，作用24h差异不具有统计学意义(胗O．05)；作用48h差异具有统计学意义伙0．05)。结论(1)CsAlug／ml作用24h，不能对HLE—B3增殖的抑制产生有效作用；．在持续作用至48h时，CsA能够有效抑制HLEB．3细胞的增殖。CsA对HLEB．3细胞抑制呈时间依赖性；在有效抑制浓度(1ug／m1)下，CsA对HLEB．3的抑制呈浓度依赖性，其半