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《论环孢霉素a对人胚肺纤维母细胞增殖及凋亡的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、论环孢霉素A对人胚肺纤维母细胞增殖及凋亡的影响--> [摘要]目的:通过观察环孢霉素A(CsA)对人胚肺纤维母细胞(2BS)增殖及凋亡的影响,探讨该药在抑制肺纤维化中的疗效及其作用机制。方法:采用生物活性法观察药物对2BS细胞的增殖抑制作用,采用流式细胞仪检测药物诱导的2BS细胞凋亡小体形成百分率,同时观察其对细胞周期的影响,并与甲基强地松龙(M-pred)对比研究。结果:①CsA和M-pred两种药物对2BS细胞均有增殖抑制作用,分别与对照组比较差异有显著性(P[关键词]环孢菌素/治疗应用甲泼尼龙肺纤维化/药物疗法成纤维细胞细胞凋亡EffectofCsAonProliferat
2、ionandApoptosisofEmbryoFibroblastofHumanLung[Abstract]Objective:TostudythetreatingeffectofCsAandM-predontheproliferationandapoptosisofpulmonaryfibrosis(2BS).Methods:Theproliferationof2BScellsetryinvitro.Results:BothCsAandM-predhadtheGastroenterology/inhibitoryfunctionforproliferationof2BScells
3、,thereoreeffectiveintreatmentofpulmonaryfibrosis. [Keyonaryfibrosis/drugtherapy;Fibroblasts;Apoptosis近年来,间质性肺疾病发病率显著增高,其发病机制仍不十分清楚,尚无较好的治疗方法,发病中均有肺内成纤维细胞聚集和胶原等细胞外基质(ECM)过多沉积,而肺成纤维细胞又是肺内ECM合成的主要细胞。因此,成纤维细胞在肺纤维化过程中起着举足轻重的作用[1]。近期研究表明,人体正常组织中都存在细胞凋亡[2]。纤维化不仅是一种细胞增殖异常疾病,也是一种细胞死亡异常疾病,纤维化的发生、发展与细胞凋
4、亡的调节紊乱有密切关系,细胞增殖与死亡之间的平衡失调可能是其发生的又一基础[3]。目前认为,糖皮质激素对纤维化早期有一定疗效,但长期大量应用有许多不良反应,选择有效而副作用小的药物治疗肺纤维化十分重要。人胚肺纤维母细胞(2BS)可于体外反映肺纤维化形成状况,因此,本文选择2BS细胞,通过观察环孢霉素A(CsA)和甲基强的松龙(M-pred)对其增殖抑制作用及其凋亡小体形成百分率的情况,探讨CsA对肺纤维化的疗效及其作用机制。 1材料与方法1.1主要试剂和药物甲基强的松龙(法玛西亚-普强公司比利进分厂);环孢霉素A(瑞士Sandoaz公司);胰蛋白酶(Gibco);四氮唑蓝(MTT
5、,Sigma);碘化丙啶(PI,Sigma)。 1.2细胞系25代2BS细胞由长春生物制品所惠赠,本室传代培养。 1.3主要仪器设备流式细胞仪(BectonDickinson,美国);全自动酶光度计(Bloard550型,日本)。 1.4细胞培养方法采用单层细胞培养法。将2BS细胞置于100ml培养瓶内,生长于含12%~15%胎牛血清的Eagles-MEM培养液中,在37℃、饱和湿度、含5%CO2的培养箱中传代培养,细胞以1∶4传代,传代间隔6d。 1.5利用生物活性法观察药物对2BS细胞增殖的影响根据CsA和M-pred在人体内应用的浓度范围,选择5种不同的药物浓度,加入
6、到96孔细胞培养板中,内有2BS细胞,每一浓度设3复孔,并设无药对照组,置37℃CO2孵箱中培养,在24、36、48、60和72h后采用改良的MTT比色法测定结果[4],用酶联免疫检测仪测定A570值,,并计算细胞增殖抑制率(CIR%)。 CIR%=(1-实验样本A值阴性对照平均A值)×100%1.6采用流式细胞仪测定2BS细胞凋亡小体形成百分率(AP)[5]选择不同浓度的M-pred和CsA分别作用于2BS细胞,培养24、36、48h后收集细胞,调细胞毕业论文浓度为1×106·ml-1,经Rnase裂解、PI染色后,采用FACScan流式细胞仪进行单参数分析,用Cellfit软
7、件收集1×104个细胞,细胞凋亡数据用Lysys软件分析。用百分率记录亚二倍体细胞数据及细胞周期各时期数据。 1.7统计学方法数据统计采用t检验。 2结果2.1CsA、M-pred对2BS细胞的增殖抑制作用不同浓度的CsA、M-pred分别作用于2BS细胞24、36、48、60和72h,对其均有明显的增殖抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P-->和量效关系,其增殖抑制率随时间的逐渐延长和浓度的增加而增高,且CsA的作用明显高于M-pred,见表1。 2.2Cs
