thapsigargin对人晶状体上皮细胞系sra01-04增殖抑制的作用机制

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1、Thapsigargin对人晶状体上皮细胞系SRA01/04增殖抑制的作用机制：姬红培，吴明星，彭瑞萍【摘要】【目的】研究thapsigargin（TG）对体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04增殖的影响，并探讨其分子机制。【方法】不同浓度TG处理SRA01/04细胞72h，噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖；流式细胞仪（PI法）检测细胞周期改变；透射电镜观察细胞超微结构变化；TUNEL法检测细胞核中DNA的断裂情况；激光共焦显微镜和流式细胞仪检测Caspase3活性亚单位（17/19ku）的表达及阳性细胞表达率

2、。【结果】MTT法测得TG为0.325～5μmol/L时，细胞增殖抑制率变化显著，IC50大约为0.8μmol/L;透射电镜显示TG处理SRA01/04细胞膜皱缩，染色体浓缩、边集、核膜裂解、凋亡小体形成;流式细胞仪（PI法）及TUNEL法检测TG浓度为0，0.1，0.5，1，10μmol/L分别处理SRA01/04细胞72h，细胞凋亡率随浓度的增加而增加，呈浓度依赖性;TG处理后细胞Caspase3阳性表达率也呈浓度依赖性增加,TG为10μmol/L时，几乎每个细胞浆内Caspase3都被激活。【结论】Thapsig

3、argin可能通过激活Caspase3为诱导体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞凋亡而抑制其增殖，TG为预防后发性白内障的药物研究提供了基础。【关键词】Thapsigarigin；晶状体上皮细胞；细胞凋亡；Caspase3EffectandMechanismofThapsigarginonProliferationofHumanLensAbstract:【Objective】Toinvestigatetheeffectofthapsigargin(TG)ontheproliferationofhumanle

4、nsepithelialcellslineSRA01/04invitroandunderlaythemolecularmechanism.【Methods】SRA01/04cellsediumethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide(MTT)assay.Ultrastructureissionelectronmicroscopy.DNAfragmentationeasuredbyterminaldeoxynucleotidyltransferase-media

5、teddUTP-nickend-labeling(TUNEL).Cellcycleanalysisinedbyfloetry(FCM)iodine(PI)staining.Expressionofcleavedcaspase3proteinicroscopyandfloetry.【Results】Thegro0.325to5μmol/L.TheultrastructureoftreatedSRA01/04cellsshoatincondensation,chromatincrescentformation,nucleu

6、sfragmentationandapoptoticbodyformation.Exposedto0,0.1，0.5，1.0,10μmol/LTGfor72h,theapoptoticratebyfloetry(PImeans)andTUNELanner.Theexpressionofcaspase3anner.Thepositiverateol/L.【Conclusion】Thegroannerinvitrobyinducingup-regulationofcaspase3activationandstartinga

7、poptosispathaybedevelopedasapotentialtherapeuticdrugforposteriorcapsuleopacificationprevention.后发性白内障是白内障术后影响视功能的严重的远期并发症之一，白内障术后残留的晶状体上皮细胞增殖、迁移、化生是其发生的病理基础[1]。目前手术中技术和人工晶状体的光学部设计等方面的改进使后发性白内障的发生率有所下降[2,3]，但白内障术后残留的晶状体上皮细胞的增殖仍是眼科界亟待解决的的难题。后发性白内障防治的关键是发现一种能有效抑制晶体

8、上皮细胞增殖且无明显毒性作用的药物。Thapsigargin(TG)是上世纪70年代从草药Thapsiagarganica根部所提取的一种蓓半萜内酯，特异性抑制细胞内质X钙泵[4]，破坏Ca2+的动态平衡，影响晶状体上皮细胞增殖等生物学功能[5，6]。我们将TG处理体外培养的人晶状体上皮SRA01/04细胞，研究TG能否抑制SRA