双氟胞苷对兔晶状体上皮细胞体外生长的抑制作用

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1、双氟胞苷对兔晶状体上皮细胞体外生长的抑制作用：于海涛王亚玲杨青阎洪禄【摘要】目的探讨双氟胞苷对培养的兔晶状体上皮细胞(RLECs)体外生长的抑制作用，为临床防治后发性白内障提供理论依据。方法在第3代体外培养RLECs中加入不同浓度双氟胞苷，采用MTT比色法及血细胞板计数法观察不同浓度的双氟胞苷对体外培养的RLECs增殖的抑制作用。结果浓度为64mg/L双氟胞苷在24h对RLECs无明显的抑制作用;浓度为128~4096mg/L的双氟胞苷在24、48、72h对RLECs有明显的抑制作用，与阴性对照组比较差异有统计学意义(F=22.248~34.0

2、90，q=2.188~11.353，P<0.05)。在同一作用时间随双氟胞苷浓度的增高，对RLECs的抑制作用逐渐增强，各浓度之间比较差异具有统计学意义(q=2.122~10.524，P<0.05)。各实验浓度的双氟胞苷对RLECs的抑制作用随作用时间延长逐渐增强，在72h抑制作用最强。MTT比色法结果与血细胞板计数法结果一致。结论双氟胞苷可抑制体外培养RLECs的增殖，可用于抑制、预防后发性白内障的形成。【关键词】双氟胞苷;晶体;上皮细胞;细胞培养技术;兔　[ABSTRACT]ObjectiveTostudythedepressa

3、nteffectofGemcitabineonthecellsofrabbitepitheliumlentis(REL)invitro,andprovideatheoreticalevidencefortreatmentofaftercataract.MethodsThecellsofRELcitabinecitabineatdifferentconcentrationsonthecellseasuredetryandcellcounttechnique.ResultsTheGemcitabineattheconcentrationof64mg

4、/Lfor24hdidnotshog/Lfor24h,48h,and72hshoe-timecondition,theinhibitoryactionincreasedci-tabine,thedifferencesamongdifferentconcentrationseconcentration,theeffectofprohibitiondependedontime.TheresultofMTTcitabinedepressesthegrocitabine;lens,crystalline;epithelialcell;cellcultu

5、retechnique;rabbits　　后发性白内障是白内障囊外摘除术后常见的并发症,也是影响病人术后视力的最主要原因之一，其术后1、3、5年的白内障发生率在成人可以高达11.8%、20.7%、28.5%[1-2]。有关实验的结果表明，术后残留的晶状体上皮细胞的增殖和迁移，转化为成纤维细胞，可能是形成后发性白内障的主要原因之一[3-4]。本实验旨在观察双氟胞苷对培养的兔晶状体上皮细胞(RLECs)体外生长的抑制作用，为临床防治后发性白内障提供理论依据。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物取实验用家兔10只，体质量为1.5～2.

6、5kg，雌雄不限，由青岛大学医学院动物实验中心提供。　　1.1.2主要试剂与药品DMEM干粉培养基(GIBCOBRL公司)，小牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所)，胰蛋白酶(GIBCOBRL公司)，四甲基偶氮唑盐(MTT，Sigma公司)，双氟胞苷(美国礼莱亚洲公司)，青霉素钠(华北制药有限公司)，硫酸链霉素和硫酸庆大霉素(山东鲁抗医药股份有限公司)。　　1.2方法　　1.2.1培养液的配制将DMEM干粉培养基加入1000mL三蒸水配制成DMEM培养液，加入灭活的小牛血清,使之成为含体积分数0.150小牛血清的培养液，4℃冰箱保存。MTT溶液

7、:将MTT474用PBS液溶解，浓度为5mg/L,两层微孔滤膜过滤除菌，4℃避光保存。　　1.2.2RLECs的培养实验用兔空气栓塞致死后，完整摘除眼球，在超净工作台内取出晶状体，分离出连着晶状体赤道部的前囊膜。将晶状体前囊膜剪成组织碎片，均匀铺贴于培养瓶底壁，加入培养液置于培养箱中，至细胞游出相互融合，然后进行传代培养。取培养的第3代RLECs，制成细胞悬液，用血细胞板观察四角大方格的细胞数[5-7]。　　1.2.3实验分组根据条件培养液的不同，随机分为8组，阴性对照组(无血清培养液)和浓度为64、128、256、512、1024、2048、

8、4096mg/L的双氟胞苷无血清培养液组。　　1.2.4RLECs计数①血细胞板计数法[8]：将RLECs悬液调整到细胞密度为2.5×107/L，平行