原花青素对紫外线诱导晶状体上皮细胞氧化损伤保护作用的研究

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1、原花青素对紫外线诱导晶状体上皮细胞氧化损伤保护作用的研究【摘要】目的：研究原花青素(procyanidins,PC)对紫外线诱导的人晶状体上皮细胞(lenepithelialcells,LECs)DNA氧化损伤的保护作用。方法：采用照射剂量为15mJ/cm2的中波紫外线(UVB)分别照射用0(对照组)，0.05，0.1，0.2mg/mL的PC，牛磺酸(TAU)，维生素C(VC)预处理的LECs，未处理组未给予紫外线和任何抗氧化剂处理，用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测分析各PC组LECsDNA单链断裂的

2、程度，并与其他各组的检测结果相比较。结果：各PC组的尾长、尾部DNA百分比、尾力矩在数值上均明显小于对照组，且与对照组相比，差异均有统计学意义(P<0.01)。各PC实验组的尾部DNA百分比、尾力矩与未处理组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。相同浓度下，PC，TAU和VC组的各检测指标数值逐渐增大。结论：外源性PC对UVB照射诱导损伤的人LECsDNA有保护作用。PC的保护作用明显强于TAU和VC，并且在一定浓度范围内随着浓度的增加其抗氧化作用逐渐增强。【关键词】原花青素;紫外线;晶状

3、体上皮细胞;DNA损伤　　AbstractAIM:Todeterminetheprotectionofprocyanidins(PC)againstUVBinducedoxidativedamageoflensepithelialcells(LECs)entalfoundationforcataractclinicaltreatment.METHODS:LECslinesofgeneration4lyinto5groups.Asuntreatedgroup:normalculturedLECs;co

4、ntrolgroup:LECs+UVB;threetreatedgroups:PCtreatedgroups:LECs+PC+UVB;taurine(TAU)treatedgroups:LECs+TAU+UVB;VCtreatedgroups:LECs+VC+UVB.Allgroupsofantioxidantslog/mL).EachtreatedgroupJ/cm2.AllofLECsineverygroupentanhourrespectivelyandanalyzedomentbetoment

5、ineachPCtreatedgroupanduntreatedgroupallerthanthoseofTAUtreatedgroupsandVCtreatedgroups,Thedifferencesoftaillength,percentageoftailDNAandtailmomentinvariousantioxidanttreatedgroupsage.TheprotectiveeffectofPCisobviouslystrongerthanthoseofTAUandVC,andinac

6、ertainrangeofconcentration,theprotectiveeffectofPChasthepositiverelationshipofdoseeffect.　　KEYEM培养液、胰蛋白酶、非必需氨基酸、胎牛血清(美国Hyclone公司)、双抗(青霉素、链霉素)、正常熔点琼脂糖凝胶、低熔点琼脂糖凝胶(美国sigma公司)、溴化乙锭(Ethidiumbromide，EB)、PC、牛磺酸、VC(成都生物制剂公司)、Olympus倒置荧光显微镜(日本Olympus公司BX51型)、UVB

7、段紫外灯(美国SP公司xx15N/F型)、电泳仪(Tanon公司HE120型)。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养使用含100g/L胎牛血清、非必需氨基酸、50g/L双抗的MEM完全培养液，在37℃，50mL/LCO2，90%湿度的孵箱中人LECs单层贴壁生长。　　1.2.2细胞分组及抗氧化剂处理将LECs传代培养取第4代细胞随机分为5组。未处理组：正常培养的LECs;对照组：正常培养的LECs+UVB;实验组：PC组：LECs+PC+UVB;TAU组：LECs+TAU+UVB;VC组：LECs+

8、VC+UVB。各抗氧化剂组按终浓度从低到高(0.05，0.1，0.2mg/mL)再分为3个亚实验组。各实验组于UVB照射前2h加药，常规培养。　　1.2.3紫外线照射紫外灯照射强度为1.5m2(每次使用前都预先经紫外线仪器测量，避免由于衰减造成的强度不一致)，照射时间为10s，即采用的照射剂量为15mJ/cm2。取对数生长期的细胞置于暗室中紫外光源下10cm处，照射前将培养液弃去，用PBS轻柔冲洗2次，照射时打开培养皿。照射后加入完全培养液