原花青素对内毒素诱导的肠道屏障损伤的保护作用及机制研究

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1、隶韵大·粤硕士学位论文万方数据原花青素对内毒素诱导的肠道屏障损伤的保护作用及机制研究万方数据StudyontheProtectiveEffectsandMechanismofProanthocyanidinAgainstLPS-·inducedIntestinalBarrierInjuryAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYLiuHUl‘LlUHSupervisedbyAssociateProfessorZhangXiaoqia

2、ngSchoolofPublicHealthSoutheastUniversityMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：主：l鱼日期：翌f坚15：z东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图

3、书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：啦导师签名Iiii：超!±：≤!!Il吵峰敬万方数据中文摘要原花青素对内毒素诱导的肠道屏障损伤的保护作用及机制研究研究生：刘卉导师：张小强副教授南京东南大学公共卫生学院原花青素(Proanthocyanidin，PC)是

4、自然界中广泛存在的一大类多酚类聚合物的总称，研究表明其安全性较高，具有丰富的生物学作用，在人体的生物利用率也很高，在营养、医药、保健等领域的应用日益广泛。内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的一部分，又称脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)，能诱导肠粘膜促炎因子表达升高，引起肠道炎症反应，导致粘膜功能障碍，从而使肠粘膜受损，致使细菌易位，引起远隔器官感染。本研究分别以大鼠肠隐窝上皮细胞(IEC．6)和雄性SD大鼠为研究对象，用内毒素诱导炎性损伤，给予不同剂量的原花青素干预，从体外和体内水平观察其对内毒素诱导的炎性损伤的影响，探讨原花

5、青素对内毒素诱导的肠道屏障损伤的保护作用及其相关机制。目的1、研究原花青素对内毒素诱导的大鼠肠隐窝上皮细胞毒性的影响。2、研究原花青素对内毒素诱导的大鼠肠道屏障损伤的影响。3、探讨原花青素对内毒素诱导的肠道屏障损伤的保护作用机制。方法1、通过MTT试验、HE染色法和细胞创伤愈合试验检测原花青素对LPS诱导损伤的IEC．6细胞增殖、分化和迁移的影响。通过倒置显微镜观察原花青素对LPS诱导损伤的IEC．6细胞形态学变化的影响。2、通过ELISA试验检测原花青素对LPS诱导损伤的IEC．6细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF．a)、自细胞介素．6(IL．6)

6、、白细胞介素．1B(IL．1p)水平的影响。3、对SD大鼠进行原花青素灌胃两周后，腹腔注射LPS，6小时后处死。通过观察大鼠临床表现、血清TNF．a检测、血清D．乳酸水平测定以及小肠粘液分泌型免疫球蛋白A(sIgA)测定来探讨原花青素对LPS诱导的大鼠肠道屏障损伤的影响。4、通过实时荧光定量PCR试验(qRT．PCR)和WestemBlot试验检测原花青素对LPS诱导损伤的IEC．6细胞紧密连接蛋白occludin和claudin．1mRNA表达水平及occludin蛋白表达水平的影响。结果1、原花青素对LPS诱导损伤的IEC．6细胞增殖、分化

7、、迁移具有促进作用，并呈现剂量．效应关系，且随着原花青素干预时间的延长，细胞迁移率呈上升的趋势。细胞形态学研究表明，原花青素对LPS诱导引起的细胞形态变化和细胞密度降低具有改善作用。万方数据东南大学硕士学位论文2、ELISA结果显示原花青素能够抑制LPS诱导损伤后IEC．6细胞TNF．a、IL．6和IL．1D分泌水平的上升，并且呈现剂量．效应关系。3、动物实验结果显示腹腔注射LPS后，大鼠出现倦怠及抖动，皮毛蓬松无光泽、呼吸急促、精神萎靡，腹泻、腹胀等临床表现，血清TNF．a分泌水平上升，血清D．乳酸含量增加，小肠粘液分泌型免疫球蛋白A合成降低

8、。而原花青素能够缓解LPS诱导后的肠道炎症，改善大鼠的各种临床症状，降低血清TNF．a分泌水平和血清D．乳酸水平，提高小肠粘液分泌型免疫球蛋白A的含量