狂犬病野毒8202株核蛋白基因克隆和序列比较分析

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1、吉林农业大学硕士学位论文狂犬病野毒8202株核蛋白基因克隆和序列比较分析姓名：李影申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：钱爱东20030601独创性声明本人声明所皇交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：夸彰签字日期：二。口多年∥月∥同学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了

2、解吉林农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即吉林农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权吉林农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：誉影签字日期：2．府03年∥月／矽日翮躲践丢氯签字日期：力口弓年∥月／∥同学位论文作者毕业后去向：丧梯衷立【_大堂删鳓罄豌以些毖缓研錾工作单位：吉林虚业犬学通讯地址：老林琅挚Ⅱ然锄料{}技术a}聋如锨生物教研莹．电话：7芴，牛夸67386。晦

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5、g吉林农业大学硕士学位论文狂走病野毒8202抹核蛋白基四克睦和丰列比较j}析摘要狂犬病是人类最古老的疾病之一，也是当前世界上流行最广、危害最严重的人兽共惠传染病。它是由狂犬病病毒及狂犬病相关病毒所引起的，能感染几乎所有的温血动物，惠病动物一旦发病几乎百分之百的死亡。据WHO的最新统计，全球每年因狂犬病死亡的人数约为3．5～5万人，而造成家畜和其他动物死亡的损失更是无法估量。但是，近年来随着分子生物学和免疫学的发展和应用，对狂犬病毒结构、基因序列及其主要功能以及发病和免疫机制等都有了新的认识和了解，使得防控狂犬痛有据可依，有章可循，其中对狂犬

6、病病毒核蛋白的研究也不断地得到深入。一般认为：狂犬病病毒核蛋自在各毒株之间序列高度保守，可用于狂犬病病毒的检测、基因分型以及研制核酸疫苗等。本实验以测定狂犬病野毒抹(8202株)的N基固序列为主要研究内容，目的在于研究8202株的分子生物学特性，探讨其基固型与现用疫苗株N基因的差异和关系，为有效地使用疫苗提供科学依据。同时，也旨在为筛选弱毒株、疫苗株、研制基因工程疫苗和基因疫苗、诊断试剂及全基因序列的测定提供有关数据。本研究应用现在广泛使用的RT、半嵌套式PcR技术，设计了三个引物即一对外引物和一个内引物，对狂犬病野毒8202株核蛋白基因进行扩增，第一轮

7、仅扩增出一条约750bp的片段，但目的片段“尚未出现”；第二轮扩增出了多条片段，其中包括目的片段，而后将目的片段与T栽体相连并转化DH。。，获得了重组菌。应用DNAsisv2．5Demo软件将目的片段的测序结果与几株狂犬病病毒株3aG、PV、CVS、HEP—F1ury、RC—ttL、Nishigahal8．、SADB]9进行比较分析，结果表明8202株与3aG的核苷酸和氨基酸的同源性最高，分别为93．9％和94．6％，两者均属于同一个基因型，为基因I型并在同一个亚型之中。此外，比较发现各毒株的抗原位点I、III、IV均相同，没有一株发生变化，但是8202

8、株的抗原住点II中第79位氨基酸由谷氨酰胺(Q)变成了谷氨酸(E)这可能会影响到核蛋白的空间结构和免疫原性，于是本实验又对蛋白质的二级结构进行了预测，以期为后续研究打下基础。关键词狂犬病病毒核蛋白基因RT一半嵌套式PeR序列分析吉林农业大学硕士学位论文班犬痛野毒8202株檀蛋白基因克隆和序列比较分析AbstractCloningandSequenceAnabsisofNucleoproteinGenesofRabiesVirus8202StrainThenucleoproteinofrabiesvirusisresponsibleforencapsiea

9、tionofviralRNAs，andtheLprotein，incooperationwiththePproteinfunctionasanRIgA-dependentRNApolymerase．AndNproteinalonecarlinduceprotectiveimmunityagainstlethalinfectioninanimals．Furthermore，thehomologyofnucleoproteingenesderivedfromdifferentrabiesvirusstrainsisratherconservative．Asa

10、result，itiswidelyusedthemolecularepedemi