重组腺病毒介导的RNA干扰对肝肿瘤细胞的干预实验研究

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1、山东大学博士学位论文重组腺病毒介导的RNA干扰对肝肿瘤细胞的干预实验研究姓名：牟壮博申请学位级别：博士专业：内科学（消化系病）指导教师：赵幼安20070516山东大学博士学位论文重组腺病毒介导的RNA干扰对肝肿瘤细胞的干预实验研究博士研究生：牟壮博博士生导师：赵幼安摘要背景与目的：人肝细胞癌是世界范围最高发的恶性肿瘤之一，亚洲和非洲尤其高发，估计每年有五十万新发病人和一百万死亡病人。肝癌的病因已经研究得比较清楚，在中国主要是乙型病毒感染，近年来酒精性肝病有上升趋势，另外黄曲霉素、糖尿病、代谢性肝病、体重过大等都是危险因素。肝癌是多因素多步骤发病，涉及多个基因变异最终导致肝细胞恶变。由于肝

2、癌致病原因多样发病机制复杂，其确切分子机制至今尚不十分清楚。各种致病因子导致肝细胞反复受损、反复修复，可能导致基因变异，例如细胞癌基因激活、抑癌基因失活、DNA配对。错误、染色体损伤、生长因子和血管生长因子过度表达等。肝癌与肝硬化关系密切，70一90％的肝癌病人有肝硬化。肝癌的治疗可分为四类：外科治疗(肿瘤切除和肝移植)，经皮介入治疗(乙醇注射、射频热剥蚀)，经血管介入治疗(栓塞、化学药物灌注、化学药物栓塞)和药物治疗(包括基因和免疫治疗)。有望治愈肿瘤的方法包括肿瘤切除、肝移植和经皮介入治疗。经过选择的病人接受经动脉介入治疗可提高部分病人的生存时间。药物治疗和常规放射治疗没有明显疗效。

3、外科治疗方面，不合并肝硬化的肝癌病人接受手术切除是危险性相对比较低，治疗效果比较肯定的选择，遗憾的是大多数病人合并肝硬化，切除范围受到限制，切除范围过大容易导致手术后肝衰竭。肝功能正常、肿瘤单发、无临床症状的肝癌病人手术效果比较好，五年生存率可以达到70％。但是肿瘤成功切除五年后，有70％的病人硬化的肝脏可能再发生癌症。肝移植应该是治疗肝癌比较有效的方法，能一次性切除肿瘤和硬化的肝脏，还能防止肿瘤复发，但是如果肿瘤体积大或者多发则治疗效果不佳，另外供肝来源不足也极大地限制了该方法的使用，该治疗方法的推广应用还面临着伦理、社会和法律等诸多问题。经皮介入治疗仅仅适用于瘤体比较小而且不能手术切

4、除的肝癌病人，可通过乙醇注射、射频或微波热疗激光热疗、及冷冻等方法进行，使用范围有限。经动脉栓塞或化学栓塞治疗适用’山东大学博士学位论文于既不能手术切除又不能通过经皮途径治疗的肝癌病人。有15--50％的病人对该治疗方法部分有效，与保守治疗比较能延长病人生存时间，肝功能差的病人无益处。总之传统治疗方法治疗效果不十分理想，病人预后差。随着分子生物学的进展人们观察到一些基因改变与肝癌有关，例如：p53变异、c-myc和cyclinD1过度表达，杂合性缺失(10ssofheterozygosityLOH)伴有肿瘤抑制基因失活，肝癌细胞中1p，4q’6q，8p，13q，16qand17p位点经常

5、发生LOH，另外几个生长因子也与肝癌的发生有关，包括转化生长因子a和B等。但是肝癌发生的分子机制尚不十分明了。近来有越来越多的证据表明表皮生长因子(EGFR)是有希望的肿瘤治疗靶点，许多肿瘤显示EGFR异常增强或结构性EGFR表达。有报道人肝细胞癌EGFR表达，与肿瘤的侵袭性生长特性有关。尤其是低分化肝细胞癌EGFR过表达，是预后不良的指标，它与肿瘤早期复发和肝外转移正相关。因此EGFR是治疗肝细胞癌新方法的有希望的靶点。近几年研究发现EGF／EGFR系统对肝细胞生长有强刺激作用。表皮生长因子受体(EGFR)是原癌基因erbB一1的表达产物，属I型跨膜酪氨酸激酶糖蛋白生长因子受体。分子量

6、约为170KD。配体与EGFR结合后，启动其信号转导，引起下游一系列的级联反应，主要通过两条途径将信号传递至细胞核，一条是Ras—R矗foMAPK(有丝分裂原活化蛋白激酶)途径，通过cdun、c-fos将信号传导至核内激活AP．1；另～条是P13K(磷脂酰肌醇3激酶)一PKc—IKK途径，使Ird3a磷酸化后导致NF一1cB移位至核内，最终将胞外信号传导至核内，促使细胞增殖、血管形成及抑制调亡，当EGFR过度表达或表达失调时会导致肿瘤形成。研究显示肝细胞癌常有EGFR过度表达或异常表达，抑制EGFR系统能抑制有EGFR表达的人肝癌细胞生长。目前，以EGFR为目标的治疗方略集中在细胞外配体

7、结合部、细胞内酪氨酸激酶和配体。临床前研究和临床研究显示多种单克隆抗体阻断细胞外EGFR与其配体的结合，具有～定抗肿瘤作用。在第一代抗EGFR抗体Cetuximab刚刚经过欧洲和美国使用核准几星期后，第二代抗EGFR抗体已经在澳大利亚进入最初的临床试验阶段。两篇发表于生物化学杂志的文章，提到这种新一代的EGFR抗体806，可以在J下常细胞和癌细胞上辨别EGFR分子。目前市面上已经有一个抗EGFR抗体，山东大学博士学位论文更多的抗体正