慢病毒介导的rna干扰rpmi-8226细胞mic-1表达抑制破骨细胞成熟的实验研究

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1、分类号：R5学校代码：10392学科专业代码：100201学号：200902005福建医科大学博士研究生毕业论文慢病毒介导的RNA干扰RPMI-8226细胞MIC-1表达抑制破骨细胞成熟的实验研究Lentivirus-mediatedRNAInterferenceofMIC-1ExpressioninRPMI-8226CellsInhibitsHumanOsteoclastsMaturation学位类型：医学博士所在学院：福建医科大学第一临床医学院研究生：袁明洲学科、专业：内科学导师：陈君敏教授

2、研究起止日期：2009年10月至2013年2月答辩日期：2013年6月5日二○一三年五月1目录英文缩略词表………………………………………………………………………(1)中文摘要……………………………………………………………………………(3)英文摘要……………………………………………………………………………(6)前言………………………………………………………………………………(10)第一部分Transwell体系建立骨髓瘤微环境下破骨细胞成熟的实验研究……(12)材料与方法…………………………………

3、………………………………(12)结果…………………………………………………………………………(15)讨论……………………………………………………………………………(18)第二部分MIC-1真核表达载体的构建及鉴定………………………………(20)材料与方法…………………………………………………………………(20)结果…………………………………………………………………………(34)讨论…………………………………………………………………………(41)第三部分MIC-1shRNA干扰慢病毒系统有效干扰靶

4、点的外源性筛选及慢病毒的包装与浓缩……………………………………………(45)材料与方法…………………………………………………………………(45)结果…………………………………………………………………………(59)讨论…………………………………………………………………………(67)第四部分慢病毒介导的RNA干扰RPMI-8226细胞MIC-1表达抑制破骨细胞成熟的实验研究…………………………………………(70)材料与方法………………………………………………………………(70)结果………………………

5、………………………………………………(74)讨论………………………………………………………………………(79)总结………………………………………………………………………………(83)参考文献…………………………………………………………………………(84)综述………………………………………………………………………………(89)致谢………………………………………………………………………（99）附录常用试剂配方……………………………………………………………(100)2英文缩略词表MIC-1Macrop

6、hageInhibitoryCytokine-1巨噬细胞抑制因子-1PBMNCPeripheralbloodmononuclearcells外周血单个核细胞EDTAEthylenediaminetertaarceticacid乙二胺四乙酸二钠FCMFlowcytometry流式细胞术kDKilodalton千道尔顿ODOpticaldensity光密度PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PIPropidiumiodide碘化丙啶PAGEPolyacyrlamidege

7、lelectorphoersis聚丙烯酞胺凝胶rpmRevolutionsperminute每分钟转数SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠MTTMethlthiazoletetrazolium四甲基噻唑蓝TrisTtrishydroxymethylaminomethane三（羟甲基）氨基甲烷TBETris,boracicacid,EDTAbuffer硼酸、EDTA缓冲液MMMultiplemyeloma多发性骨髓瘤MOIMultiplicityofinfection感染复

8、数ECLEnhancedchemiluminescence增强化学发光法PCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应MBDMyelomabonedisease骨髓瘤骨病OCosteoclasts破骨细胞DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜GFPgreenfluorescentprotein绿色荧光蛋白RANKLReceptoractivatorofnuclearfacto细胞核因子-кB受(NF)-кBligand体活化因子配体shRNAsmallhairp