肝癌多基因表达异常初步研究

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1、授予单位代码学号或申请号1045903341258郑州大学硕士学位论文论文题目：肝癌多基因表达异常初步研究作者姓名：学科门类：专业名称：导师姓名、职称：丁光伟医学内科学杨玉秀教授．二零零六年五月郑州大学2006届硕士论文肝癌多基因表达异常初步研究研究生丁光伟导师杨玉秀河南省人民医院消化内科郑州450003摘要原发性肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCc，简称肝癌)是常见的恶性肿瘤之一，目前对其治疗手段有限，预后较差。肝癌的发生发展是一个多病因、多阶段、多因素参与的过程。在肝细胞癌变过程中存在众多基因表达异常，如抑癌基因的突变或缺失，癌基因的激活、DNA修复基

2、因的异常表达等。众多基因在肝癌中的表达情况及在肝癌中的作用还不清楚。慢性乙型肝炎病毒(HepatitisBvims，HBv)感染与肝硬化、肝癌的发生进展密切相关，研究表明HBv感染及其相关性肝硬化是肝癌发生的危险因素。我国是HBv流行的高发区，研究认为HBV整合到宿主细胞基因组中改变了细胞基因表达是感染HBv肝细胞癌变的关键。因此有必要研究HBv相关性肝硬化和肝癌的基因表达谱，这对乙肝相关性肝癌的诊断、治疗、预防具有重要意义。基因芯片是将大量靶基因(或基因片段)有序地、高密度地点在玻璃片或塑料片上等载体所形成的矩阵，分为在固相载体上进行原位合成或事先合成寡核苷酸探针或cDNA后固定于

3、载体表面两种芯片，寡核苷酸芯片属于前者。与传统生物学方法比较，芯片检测具有高通量、高效及较高的特异性和敏感性的特点，可以利用芯片进行肝癌功能基因组学研究，为肝癌诊断提供工具并有助于发展新的治疗手段。因此本实验利用寡核苷酸芯片研究蛐v相关性肝癌基因表达谱，筛选肝癌差异基因并初步分析部分基因在肝癌中的作用，为肝癌的预防、诊断和治疗提供分子生物学资料；并利用生物信息学方法分析癌基因、抑癌基因、DNA修复基因和细胞周期相关基因在肝癌中的具体表达情况和作用。材料与方法15例肝癌组织来自河南省人民医院住院手术患者，5例肝硬化及5例正常肝组织来自同期因其它肝脏疾病住院手术患者，所有标本在离体后O．

4、5小时内放入液氮中冷冻保i；，。、。．。鼹译，。。h‰飞峨嗨噍‰‰渗，；，，、i．，：一，。，，，。，，。，。；，逸援懑譬。，郑州大学2006届硕士论文肝癌多基因表达异常初步研究存。肝癌及肝硬化患者HBv表面抗原均阳性，均无放射治疗或化疗史。所有标本均行普通唧染色，光镜下确定标本组织类型。用TRLrol试剂抽提组织RNA后并纯化，凝胶电泳检验RNA质量，反转录得到cDNA，合成生物素标记的cRNA后和含有18993个已知基因的A￡fymctrixu133plus2．0芯片进行杂交。用GeneP政4JD00A荧光激光扫描系统对芯片进行扫描，G吧nePixPro3．O分析软件处理杂交信号

5、，microamvsuite5．0软件进行数据处理，计算Ratio值(Cy5／cy3)，获取结果。表达变化2倍以上的基因即其cy5／Cy3大于2或小于0．5的基因被认为是差异表达基因。表达变化5倍以上的基因即其Cv5／Cv3大于5或小于0．2的基因被认为是明显差异表达基因。№nhem印迹技术检验芯片分析结果的可靠性。查阅NCBl、GENEMAP、KEGG、B10CARTA等网站和Af钾metrixu133plus2．O信息资料获得人类癌基因406个，317个基因可以在芯片中查找到；抑癌基因29个，在芯片上均可找到；DNA修复基因246个，有239个在芯片上可以找到；细胞周期相关基因8

6、1个，有80个在芯片上可以找到。结果1总RNAD260／D280>1．9'18s和28s电泳条带清晰芯片，孙舱质量可靠：Nonllem印迹的分析结果和寡核苷酸芯片结果具有可重复性。2与正常肝组织相比，筛选肝硬化差异表达基因118个，其中上调表达基因数为63，下调表达基因数为55；明显差异表达基因13个，上调基因8个，下调基因5个。3与正常肝组织相比，筛选肝癌差异表达基因1455个，其中上调表达基因761个，下调表达基因数694个；明显差异表达基因241个，上调基因169个，下调基因72个。4对比研究肝硬化和肝癌共同差异基因表达表明，在肝硬化上调表达的基因中，25个基因继续在肝癌中上调

7、表达，2个基因下调表达，36个基因在肝癌中阴性表达；在肝硬化下调表达的基因中，36个基因继续在肝癌中下调表达，1个上调表达，18个在肝癌中阴性表达。5在基因芯片317个原癌基因中，表达阳性基因51个，其中17个下调表达，34个上调表达。29个抑癌基因中，阳性表达基因5个，其中3个下调表达，2个上调表达。239个DNA修复基因中，阳性表达基因47个，其中14个下调表达，33个上调表达。80个细胞周期相关基因中，阳性表达基因18个，其中4个下调表达，14个上调