低剂量亚砷酸钠致hbe细胞恶性转化过程中keap1nrf2-are信号通路的作用

《低剂量亚砷酸钠致hbe细胞恶性转化过程中keap1nrf2-are信号通路的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、人肩A拿SOOCHOWUNIVERSITY硕论文题目低剂量亚砷酸钠致HBE细胞恶性转化过程一___中Keapl/NrG-ARE信号通路的作用研究生姓名___________________杨旭_____________指导教师姓名___________________安艳______专业名称_________________卫生毒理学___________研究方向_________________环境毒理学___________论文提交日期2015年4月2苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大

2、学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在____年__月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：AM日期：2帅'今10导师签名：派日期2^±1〇低剂量亚砷酸钠致HBE细胞恶性转化过程中Keap1/Nrf2-ARE信号通路的作用中文摘要低

3、剂量亚砷酸钠致HBE细胞恶性转化过程中Keap1/Nrf2-ARE信号通路的作用中文摘要目的探讨低剂量亚砷酸钠致人支气管上皮（humanbronchialepithelial，HBE）细胞恶性转化过程中，细胞氧化还原状态变化情况及Keap1/Nrf2-ARE抗氧化信号通路相关基因表达动态变化趋势，为阐明砷致癌作用的分子机制开辟新的研究途径。方法1.HBE细胞恶性转化鉴定用1µmol/L亚砷酸钠连续染毒HBE细胞，同时设立传代对照组。通过形态学观察、细胞计数法检测生长动力学改变、Elisa法检测基质金属蛋白酶-9（MMP-9）以及软琼脂克隆实验鉴定细胞恶性转化情况。2

4、.HBE细胞恶性转化过程中Keap1/Nrf2-ARE信号通路相关指标表达检测将1µmol/L亚砷酸钠染毒组定义为染毒组，将代数匹配对照组定义为传代对照组。建立低剂量亚砷酸钠致HBE细胞恶性转化模型后，分别于暴露1、8、15、22、29、36、43代,以流式细胞仪检测细胞活性氧（ROS）水平，以硫代巴比妥酸（TBA）比色法检测细胞丙二醛（MDA）含量，以WST-1法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活力，以Westernblot方法检测Keap1/Nrf2-ARE抗氧化通路相关蛋白Nrf2、Keap1及下游基因HO-1蛋白表达情况。3.T-HBE细胞Keap1/Nrf

5、2-ARE通路相关指标表达检测将染砷组软琼脂克隆试验中阳性（≥30个细胞）集落中单个克隆细胞挑出，继续扩大培养，命名为恶性转化的HBE细胞（T-HBECells）。再次对T-HBE细胞、传代对照HBE细胞通过上述实验检测ROS、MDA、SOD、Nrf2、Keap1、HO-1表达情况。4.转录因子Nrf2对亚砷酸钠致HBE细胞恶性转化的影响根据上述实验结果，对T-HBE细胞的Nrf2基因进行siRNA转染使其表达沉默，I中文摘要低剂量亚砷酸钠致HBE细胞恶性转化过程中Keap1/Nrf2-ARE信号通路的作用同时设立传代对照组、转染ConsiRNA组及T-HBE组作为

6、对照。用Westernblot方法检测Nrf2沉默情况，同时检测通路下游基因HO-1表达情况。沉默Nrf2表达后，分别对4组细胞用MTT法检测细胞增殖情况，用划痕实验（Wound-healingcellmigrationassay）检测细胞迁移情况，用软琼脂克隆（SoftAgar）形成实验检测细胞锚着独立性生长情况。结果1.HBE细胞恶性转化鉴定（1）与传代对照组HBE细胞相比较，染砷组细胞胞核与胞浆分界不清晰，胞浆颜色变得更为浑浊，核仁数量明显增多，细胞边界不光滑，有褶皱，呈浸润型生长。（2）分别取29、36、43代HBE细胞104个接种于24孔板中，于24、48

7、、72、96、120h后计数细胞，结果显示36代HBE细胞生长至96h和120h时，染砷组较传代对照组细胞生长明显加快（p<0.05），43代细胞生长至72h,96h和120h时，染砷组较传代对照组细胞生长明显加快（p<0.05）。43代时，染砷组倍增时间（22.56±0.96h)较传代对照组细胞(31.41±3.78h)明显缩短，差异具有统计学意义（p<0.05）。（3）分别取29、36、43代HBE细胞2×104个检测MMP-9分泌情况，结果显示36代和43代染砷组MMP-9分泌量分别为[(2.651±0.246)ng/ml]、[(2.610±0.242)n