notch信号通路在hbx致l02细胞恶性转化中作用机制初步的研究

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1、华中科技大学硕士学位论文Notch信号通路在HBx致L02细胞恶性转化中作用机制的*初步研究华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科硕士研究生：王凡导师：程斌教授中文摘要目的本研究旨在研究乙型肝炎病毒X 蛋白（HBx）在致人体非肿瘤系肝细胞L02 中的恶性转化作用并初步探讨Notch信号通路在此过程中的作用及机制。方法通过载体将HBx全长基因转入L02细胞构建稳定表达HBx的细胞株L02/HBx，观测转染后细胞的增殖，细胞周期及凋亡的变化。再将其接种细胞于BALB/c裸鼠颈背部皮下，观测其成瘤效应。进一步

2、通过qRTPCR和Westernblotting检测HBx对Notch 信号通路重要分子Jagged1,Notch1,Notch1IC及Hes1表达水平的影响。并应用γ分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch 信号通路，通过检测阻断后Notch 通路相关效应分子mRNA及蛋白表达水平的变化来判断阻断效率，并观测阻断后细胞的增殖，细胞周期及凋亡的变化。结果（1）与对照组L02细胞相比，转染HBx后的L02/HBx细胞增殖速度显著加快，凋亡率及G0/G1期细胞比例明显降低，S期细胞比例显著增高。（2）裸鼠成瘤实验发现

3、，转染HBx后的L02/HBx细胞肿瘤增长速度及肿瘤重量显著高于对照组。（3）qRTPCR及Westernblotting 检测表明，L02/HBx 细胞的Notch1,Jagged1,Notch1IC,Hes1在mRNA及蛋白表达水平上均显著高于L02细胞。（4）应用γ分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch 信号通路后，L02/HBx 细胞的存活率呈3 *国家自然科学基金（编号:30971352）华中科技大学硕士学位论文时间剂量依赖性降低，细胞周期呈时间剂量依赖性抑制，凋亡呈时间剂量依赖性增加，而阻断Notc

4、h信号通路对正常的L02细胞生物学行为几乎没有影响。结论我们的研究表明，（1）HBx可显著促进人类非肿瘤肝细胞L02细胞株在体外和体内的生长，即HBx可诱导L02细胞发生恶性转化；（2）在这个过程中Notch信号通路的激活是不可缺少的:①在L02细胞中，HBx基因促进Notch信号通路主要分子Jagged-1,Notch-1,Notch1-IC,Hes-1在mRNA及蛋白水平上的表达，即在L02细胞中，异位表达的HBx可激活Notch信号通路。结合第一部分的研究结果，初步表明Notch信号通路的激活与HBx

5、刺激L02细胞的增殖并促进其转化有关；②通过γsecretase抑制剂DAPT阻断L02/HBx 细胞的Notch 信号通路后，HBx 所介导的L02 细胞恶性转化的生物学效应亦被阻断，且呈剂量时间依赖性；③而DAPT阻断正常L02 细胞的Notch 信号通路对其生物学效应几乎没有影响。推测Notch信号通路在HBx致L02细胞恶性转化中起关键作用。【关键词】肝细胞性肝癌；HBx;Notch;NICD;Hes;DAPT.4 华中科技大学硕士学位论文Effects of Notch signaling in 

6、L02 cell malignant transformation induced by hepatitis B virus XproteinDepartmentofgastroenterology,TongjiHospital,TongjiMedicalCollege,HUSTCandidate: Wang Fan Tutor: Prof.Cheng BinAbstractObjective:Thisstudyaimed to investigate the oncogenic effectsofHepa

7、titisBvirusX protein(HBx)and itsrelationship withNotchsignaling in humannontumourhepatic cell line L02 cells.Methods:The HBx gene wasintroducedinto L02 cellsbytransfectionwith vectorsstablelyexpressing HBx.The cellgrowth,cellcycle, apoptosisand xenograftBA

8、LB/c nude micetumormodel ofcellswere studied. Using Westernblotanalysisand quantitative realtime RTPCR,the expressionlevelsofNotchsignaling componentswere also investigated.Blocking Notchsignalingwitha γSecre