人前列腺癌细胞株核酸适配体筛选及初步应用研究

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1、学校代号10532学号S12221004分类号密级硕士学位论文人前列腺癌细胞株核酸适配体筛选及初步应用研究学位申请人姓名谢琴培养单位生物学院导师姓名及职称郭秋平副教授王柯敏教授学科专业生物学研究方向纳米尺度及分子水平上的生物分析化学论文提交日期2015年6月1日学校代号：10532学号：S12221004密级：湖南大学硕士学位论文人前列腺癌细胞株核酸适配体筛选及初步应用研究学位申请人姓名：谢琴导师姓名及职称：郭秋平副教授王柯敏教授培养单位：生物学院专业名称：生物学论文提交日期：2015年6月1日论文答辩日期：2015年6月3日答辩委员会主席：聂和民

2、教授TheaptamersselectionofhumanprostatecancerandthepreliminaryapplicationresearchbyXIEQinB.S.(ChangchunNormalUniversity)2012AthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofScienceinBiochemistryandMolecularBiologyintheGraduateSchoolofHunanUniversitySup

3、ervisorProfessorGUOQiupingProfessorWANGKeminMay,2015湖南大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所。陈了文中特别加Ｗ标注引用的内容外取得的研究成果，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡。献的个人和集体，均已在文中明确方式标明本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：哨＾游曰期；９。＾年／月多曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，

4、同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫摇等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于１、保密□，在年解密后适用本授权书。２、不保密４寸’（请在Ｗ上相应方框内打）作者签名；ｉ射效日期；年／月＾日（导师签名日期：年月多日人前列腺癌细胞株核酸适配体筛选及初步应用研究摘要前列腺癌(ProstateCarcinoma,PCa)是一种严重威胁男性健康的常见恶性肿瘤，其发病率位居

5、全球男性恶性肿瘤的第二位，近年来，其发病率在全球仍在急剧增加。前列腺癌的早期发现及早期治疗，可以极大提高患者的治愈率，有效延长患者的寿命。目前，针对前列腺癌的早期诊断方法主要是建立在直肠指检、影像学检查、肿瘤标记物检查和穿刺活检等基础上，存在发现不及时、检测范围局限、易损伤正常组织、易与其它病症相混淆等缺陷，难以对前列腺癌实现早期诊断。因此，筛选获取一种特异性前列腺癌细胞的新型分子识别探针，建立一种简单、迅速、灵敏、特异性强的分子识别早期诊断技术，对前列腺癌的早期诊断和早期治疗具有非常重要的意义。Cell-SELEX技术是近年发展起来的以完整肿瘤细

6、胞为靶标的筛选技术，能从不同类型肿瘤细胞或正常细胞中筛选获得特异性识别靶细胞的核酸适配体探针，筛选得到的核酸适配体可结合天然状态的靶分子，直接用于识别、检测细胞，对癌症早期诊断和分型、肿瘤标记物的发现及肿瘤的发生与发展机制的研究提供了新的契机，在生物医学领域发挥着非常重要的作用。本文基于Cell-SELEX技术，以人前列腺高转移癌为靶细胞，人前列腺低转移癌为对照细胞，在未知细胞表面靶标的情况下，筛选出一种能高亲和力高特异性识别人前列腺癌细胞株的核酸适配体。具体内容如下：1.人前列腺癌PC-3M-1E8细胞株核酸适配体的筛选以人前列腺高转移癌PC-3

7、M-1E8细胞株为靶细胞，人前列腺低转移癌PC-3M-2B4细胞株为对照细胞，利用Cell-SELEX技术，通过增加洗涤次数，增加反筛细胞数量等手段，不断提高筛选过程中的筛选压力，从而提高筛选的效率，最后经过12轮筛选，获得了饱和富集筛选文库。通过对筛选文库克隆测序和同源性分析，获得了4条能够同时结合PC-3M-1E8和PC-3M-2B4两细胞株的核酸适配体。2.人前列腺癌细胞株核酸适配体的性质考察及初步应用研究随后对所获得的核酸适配体进行了性质分析研究，通过流式细胞术考察了细胞特异性、平衡解离常数、温度稳定性等。实验结果表明，核酸适配体具有特异性

8、强、亲和力高、温度稳定性好等特点。另外，还运用Mfold软件分析了核酸适配体的二级结构，根据二级结构的分析结果进行序列结构